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恶性肿瘤是人类死亡的主要原因之一,手术、放疗和化疗等传统的治疗方法对肿瘤治疗的效果并不理想.近年来的研究表明恶性肿瘤的发生和发展与多个基因的表达异常有关,因此,恶性肿瘤从本质上讲是一种基因病.基因治疗可纠正肿瘤的基因表达异常,如抑制原癌基因的表达、增强肿瘤抑制基因的表达等;也可通过增强机体对肿瘤的免疫反应使肿瘤细胞无法免疫逃避,可从根本上抑制肿瘤的发生和发展.结合肿瘤基础研究的成果,近十年来的肿瘤基因治疗发展了多种治疗策略,但是并未取得预期的良好效果.原因之一是缺乏特异、安全而高效的载体系统.实体肿瘤中普遍存在缺氧,缺氧状态的肿瘤细胞代谢异常,外源基因的表达水平较低,同时存在对放疗和化疗的抵抗,是恶性肿瘤预后不良的主要原因.因此,将肿瘤的缺氧状态作为治疗的靶点已成为近年来基因治疗的热点.该研究通过构建腺病毒介导的受缺氧调控的人工转录因子的表达系统驱动选择性肿瘤抑制基因MDA-7的表达,试图构建能特异地在乏氧的肿瘤细胞中表达的高效载体.一.人端粒酶逆转录酶启动子(hTRTP)的活性研究利用PCR方法从pGL3-TRTP载体上分别扩增207bp和413bp的近端hTRTP,同时扩增缺失4个Sp1位点的hTRTP,与pGL3-Basic载体连接,构建荧光素酶报告载体.二.黑色素细胞分化相关蛋白-7(MDA-7)的克隆及功能研究实验结果表明Ad-MDA-7可有效介导MDA-7在细胞中的表达,并可选择性地诱导肿瘤细胞凋亡.三.受缺氧调控的人工转录因子的构建及活性研究该研究成功构建了受缺氧调控的表达系统,并且证实ODD可介导蛋白质在正常氧条件下的降解.四.受缺氧调控的肿瘤特异性腺病毒载体的构建及功能研究:选择了长度为413bp的hTRTP调控GAL-gly-ODD-CAD融合蛋白的表达,指导由G5E1b控制的荧光素酶报告基因表达的腺病毒载体.实验结果提示腺病毒介导的受缺氧调控的表达系统的转录可受缺氧环境诱导,并增强腺病毒对肿瘤细胞的杀伤能力.