论文部分内容阅读
葡萄卷叶病(GLD)是葡萄上最重要的病毒病害之一，在全世界各葡萄产区均有发生。到目前为止，己从感染GLD的葡萄植株中分离并鉴定出10种葡萄卷叶相关病毒(GLRaVs)，按照发现先后顺序依次命名为GLRaV-1～10。这些病毒在血清学上不相关，单独或复合侵染葡萄均可导致GLD的发生。本研究对引起葡萄卷叶病的4种GLRaVs进行了RT-PCR鉴定，初步明确GLRaVs的侵染状况，并对我国GLRaV-1和GLRaV-7分离物的基因片段的序列进行分析。取得的主要研究结果如下：1)采用RT-PCR方法，对来源于中国农业科学院郑州果树研究所国家葡萄种质资源圃，表现有典型卷叶症状的57份葡萄样品携带GLRaV-1、GLRaV-2、GLRaV-3和GLRaV-7状况进行了分析。GLRaVs的总检出率为84.21％，但不同病毒种类其检出率有差异，GLRaV-1检出率最高，达68.42％；其次为GLRaV-3，检出率21.05％；而GLRaV-2和GLRaV-7的检出率相对较低，分别为7.00％和5.26％。不同类型的葡萄之间，病毒的检出率差异不明显，酿酒品种的GLRaV检出率80.77％(21／26)，鲜食品种的为87.10％(27／31)。红色品种的为88.89％(24／27)，白色品种的为83.33(25／30)。同一葡萄植株中多种GLRaVs复合侵染现象比较普遍。所检测样品中，二号大宛红、红艾基、红汁加美、白拉查基、阿布拉依、超宝、布阿基达希、卡拉斯玫瑰、牛心、罗马尼亚和埃拉基海尼11个品种感染有2-3种病毒。2)运用IC-RT-PCR方法对RT-PCR检测呈阳性的部分葡萄样品进行检测，结果和RT-PCR检测结果一致；对RT-PCR检测呈阴性的葡萄样品进行复检，结果仍呈阴性。IC-RT-PCR操作步骤简单，灵敏度和RT-PCR相当，适合田间样品的大量检测。3)从温室保存的表现卷叶病症状的塞米隆植株上提取dsRNA，通过RT-PCR扩增获得大小为590bp的产物，并对扩增片段进行了克隆和序列分析，该片段为GLRaV-7 HSP70基因的一部分，推测编码196个氨基酸的多肽。该序列GenBank登录号为EF093187，是在NCBI上登陆的第二条GLRaV-7的核苷酸序列。该序列与已报道的GLRaV-7 HSP70基因片段(Y15987)相似性为91％，氨基酸序列相似性为93％。另外，从品丽珠中获得大小为293bp的GLRaV-1CPd2基因片段(EF583823)。和NCBI上登录的其他分离物进行了序列比对，EF583823和报道的GLRaV-1其他分离物核苷酸序列变异较大，相似性最高仅为88％。