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第一部分人CILP2基因真核表达载体的构建和鉴定目的：构建人pIRES2-EGFP-CILP2-Flag质粒方法：提取HEK293细胞mRNA，逆转录成模板DNA,高保真酶PCR获取CILP2-Flag基因片段，经BglII和EcoRI双酶切，连接重组至pIRES2-EGFP空载质粒上。双酶切和基因测序鉴定质粒构建效果。结果：BglII和EcoRI双酶切重组质粒，经琼脂糖凝胶电泳，在约3.5kb和5.3kb处出现条带，初步鉴定重组质粒构建成功。测序结果经NCBI blast对比分析，核酸序列与GenBank中CILP2CDS区序列同源性完全一致，且C端正确带上Flag片段。结论：成功构建pIRES2-EGFP-CILP2-Flag标签质粒，为后续实验奠定了良好的实验基础。第二部分cilp2基因在小鼠体内表达分布和不同病理模型中的表达差异目的：检测cilp2基因在正常C57BL/6J小鼠体内的mRNA表达分布，以及在ApoE-/-小鼠和冠心病人中的mRNA和蛋白表达差异。方法：取普食喂养C57BL/6J12周龄雄性小鼠3只脱颈处死，留取心，肝，脾，胃，肌肉，脑，肾，肺组织，提取mRNA,逆转录成cDNA, RT-PCR测定cilp2表达分布；取C57BL/6J和ApoE-/-12周龄雄性小鼠，取主动脉和冠状动脉组织，提取mRNA和蛋白，分别用RT-PCR和western blot方法检测cilp2表达；取冠心病人和正常人骨骼肌组织，提取mRNA和蛋白， RT-PCR和western blot方法检测CILP2表达差异；重复实验3次。结果：cilp2在小鼠肌肉中表达较高，其后依次是心脏、大脑、肾脏、肺、胃、脾、肝脏和小肠；ApoE-/-小鼠肌肉、主动脉和冠状动脉组织cilp2含量较C57BL/6J小鼠明显增高；冠心病人骨骼肌中CILP2表达较正常人明显增高。结论：cilp2在动脉粥样硬化疾病模型中表达显著升高，可能在动脉粥样硬化形成过程中产生影响。第三部分CILP2分泌蛋白的验证目的：验证CILP2为分泌蛋白。方法：分别用pIRES2-CILP2-Flag质粒和pIRES2-EGFP空载质粒转染HEK293T细胞48h，提取胞内蛋白和上清培养液。用anti-Flag M2亲和磁珠免疫沉淀蛋白，western blot检测目的蛋白。各取三人300ul血浆，PBS稀释30倍，10%SDS-PAGE凝胶做western blot检测人血浆中CILP2含量，以及正常人和冠心病人血浆中CILP2表达差异。结果：转染CILP2-Flag质粒的细胞上清中含有CILP2蛋白；人血浆中含有CILP2蛋白；冠心病人血浆中CILP2蛋白含量显著高于正常人。结论：CILP2是一种分泌蛋白，在冠心病人血浆中含量高于正常人。第四部分CILP2对THP1源性泡沫细胞形成的作用目的：探讨CILP2对泡沫细胞形成的影响和可能机制。方法：oxLDL作用于THP1巨噬细胞，RT-PCR检测细胞内CILP2mRNA随oxLDL作用时间和剂量的变化；将CILP2腺病毒感染THP1巨噬细胞48h，RT-PCR方法检测清道夫受体(SR-AI，CD36，CD68，LOX-1)，TF，PAI-1mRNA的表达变化；在oxLDL存在下，感染CILP2腺病毒，油红O检测THP1巨噬细胞甘油三酯聚集情况。结果：THP1巨噬细胞内CILP2mRNA表达随oxLDL作用剂量和时间增加而增加，分别在20ug/ml和24h表达量达到最高；感染CILP2腺病毒48h后,细胞内CILP2mRNA和蛋白水平显著升高(p <0.05)，清道夫受体SR-AI,CD68mRNA较对照组有显著升高(p <0.05)；CD36、LOX-1、TF和PAI-1mRNA改变没有显著差异；油红O染色显示，在oxLDL存在下，感染CILP2腺病毒细胞内脂质聚集明显增高(p<0.05)。结论：CILP2通过增加清道夫受体SR-AI和CD68表达，有助于THP1巨噬细胞对脂质摄取，形成泡沫细胞。