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第一部分脐静脉内皮细胞的分离培养及Real Time—PCR方案设计和优化。
目的：从脐静脉中分离培养内皮细胞，并对脐带及培养内皮细胞的 RealTime—PCR检测方法进行优化。方法：1、采用胰酶灌注消化法分离脐静脉内皮细胞并进行体外培养；2、从模板质量及浓度、探针和引物浓度、反应时间等几方面对Real Time—PCR方案进行优化。结果：成功的从脐静脉中分离并培养内皮细胞，获到最适合的模板质量及浓度、探针和引物浓度及反应时间。结论：成功分离培养脐静脉内皮细胞，获得适宜的模板质量和浓度、最佳的探针及引物浓度及合适的反应时间，为下一步实验的检测奠定基础。
第二部分人脐静脉血管壁中内皮祖细胞的鉴定。
目的：鉴定脐静脉血管壁中是否存在内皮祖细胞。方法：体外培养分离脐静脉“内皮细胞”，采用免疫组织化学和Real Time—PCR技术方法鉴定培养细胞及消化前后脐带组织内皮祖细胞表面标记AC133，KDR，CD34和ENG的表达。结果：免疫组织化学和定量PCR均显示培养细胞及脐带内有AC133、KDR和CD34和ENG阳性表达。结论：脐静脉血管壁存在内皮祖细胞。
结论：
脐静脉具有动脉血管壁的结构特点。我们采用胰酶灌注消化法分离HUVEC并进行体外培养，采用免疫组织化学方法和Real Time—PCR技术，鉴定各代培养细胞及消化前后脐带组织内皮祖细胞表面标记AC133，KDR，CD34和ENG的表达，发现脐静脉中含有少量EPCs，且EPCs在体外培养时逐步向ECs进行分化。纠正了以往认为消化培养的脐静脉细胞为单纯的、成熟的内皮细胞的看法。本课题不仅进一步说明了脐静脉壁含有EPCs，而且为今后血管新生和发生及血管生物学的进一步研究奠定了理论基础。