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端粒是染色体末端的一种特殊结构,在细胞分裂增殖的过程中发生程序性缩短,从而导致细胞衰老。端粒酶具有延长端粒的功能,它在胚胎发育过程中逐渐失去活性,在绝大多数正常成体细胞中没有端粒酶活性,但在90%以上的癌症细胞中有很高的端粒酶活性,这显示出端粒酶与肿瘤细胞的高度相关性。端粒酶通过延长端粒序列,使细胞获得无限增殖的能力。在正常的人成体细胞中表达端粒酶可以延长细胞的生命周期,甚至使许多种类的细胞永生化。这些永生化细胞表现出细胞转化的一些典型特征,表明端粒酶在延长端粒以外可能具有其它功能。在端粒酶阳性的肿瘤细胞中抑制端粒酶活性会引起肿瘤细胞的死亡。端粒酶的激活是一些哺乳动物细胞形成肿瘤的必要条件。这些证据都表明端粒酶在肿瘤发生的过程中具有重要的作用。
端粒酶在正常卵巢表皮细胞中是没有活性的,但在95%以上的恶性肿瘤中具有活性。与它类似,小分子生长因子LPA在正常人中血液中的含量很低,但在卵巢患者的血浆和腹水中含量却远远超出正常人。这种现象显示出端粒酶和LPA在卵巢癌中的独特作用。
研究表明LPA几乎影响着卵巢癌细胞系的各种生理性质,包括细胞生长、迁移、入侵和肿瘤转移等。它在卵巢癌细胞系中的生物学功能与端粒酶的生物学效应之间存在相似性,表明这两种重要分子可能存在相关性。
本课题在HEY、A2780、SKOV3和OCC1四种卵巢癌细胞系中研究了LPA对端粒酶的调控作用以及信号传导通路。结果表明,经过LPA处理后,HEY、A2780和SKOV3中hTERT基因的表达和端粒酶的活性都显著高于不经过LPA处理的对照组。为了进一步研究LPA上调端粒酶的信号通路,我们用不同长度的端粒酶启动子构建报告载体进行启动子活性实验,发现hTERT核心启动子具有342bp长度的序列就可以对LPA做出响应,证明LPA调控hTERT基因表达的元件在这段启动子上。
以前的研究表明,hTERT核心启动子上有两个HIF-1α的作用元件,同时有证据表明缺氧条件可以提高LPA促进细胞迁移等的能力。于是我们对hTERT启动子上的HIF-1α作用元件进行突变,发现突变后的启动子不再对LPA处理作出响应,证明HIF-1α是LPA调控端粒酶活性信号通路上的重要分子。通过采用P13K、MAPK和mTOR的抑制剂处理HEY细胞,我们发现PI3K的抑制剂可以显著抑制LPA对hTERT基因表达和HIF-1α蛋白表达的上调作用,表明PI3K在LPA调节端粒酶活性的信号通路中也起着重要的作用。