【摘 要】
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目的:OSAHS(阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征)是一种常见病、多发病,也是近年来呼吸系统疾病研究的热点之一,其病理生理特征是在睡眠过程中由于气道塌陷、气流受限,引起反复的间歇低氧及睡眠片段化进而导致神经调节功能失衡、内分泌功能紊乱、血液动力学改变及机体微循环异常等变化,最终导致全身多系统的功能损害。OSAHS的主要特点就是间歇性缺氧,而肝脏是缺氧敏感器官,持续严重的缺氧或缺血可导致缺氧性肝炎,严
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目的:OSAHS(阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征)是一种常见病、多发病,也是近年来呼吸系统疾病研究的热点之一,其病理生理特征是在睡眠过程中由于气道塌陷、气流受限,引起反复的间歇低氧及睡眠片段化进而导致神经调节功能失衡、内分泌功能紊乱、血液动力学改变及机体微循环异常等变化,最终导致全身多系统的功能损害。OSAHS的主要特点就是间歇性缺氧,而肝脏是缺氧敏感器官,持续严重的缺氧或缺血可导致缺氧性肝炎,严重的缺氧或缺血也会导致肝细胞凋亡。同时有研究表明MiRNA-1是一种与凋亡高度相关的因子,我们的前期实验也表明MiRNA-1可能与凋亡相关。因此,本文重点考察在间歇性低氧刺激肝细胞后,MiRNA-1对肝细胞损伤的影响,并从肝细胞凋亡的角度探讨其相关机制,以发现OSAHS肝损伤治疗的新途径。方法:大鼠随机分为间歇性低氧组和常氧组,8周间歇性低氧处理后,取大鼠肝脏组织分别行HE染色和TUNEL染色,Western Blot检测凋亡相关蛋白表达,Realtime-PCR检测MiRNA-1表达量。构建肝LO-2细胞间歇性低氧模型,Realtime-PCR检测MiRNA-1和凋亡相关基因表达量,Western Blot检测凋亡相关蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡,MTT检测细胞增殖活力。构建敲减MiRNA-1的肝LO-2细胞间歇性低氧模型,Realtime-PCR检测MiRNA-1敲减效率和凋亡相关基因表达量,Western Blot检测凋亡相关蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡,MTT检测细胞增殖活力。结果:HE染色实验表明,间歇性低氧组较常氧组汇管区结构紊乱,炎症细胞聚集(P<0.05)。TUNEL实验表明,间歇性低氧组较常氧组肝细胞凋亡增多(P<0.05)。大鼠肝脏Realtime-PCR结果显示,间歇性低氧组较常氧组MiRNA-1显著上调(P<0.05)。大鼠肝脏Western Blot结果显示间歇性低氧组较常氧组凋亡相关蛋白Bax、Caspase3和Caspase9表达显著上调(P<0.05);抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著下调(P<0.05)。肝LO-2细胞Realtime-PCR结果显示,间歇性低氧组较常氧组MiRNA-1显著上调(P<0.05);凋亡相关基因Bax、Caspase3和Caspase9表达显著上调(P<0.05);抗凋亡基因Bcl-2的表达显著下调(P<0.05)。肝LO-2细胞Western Blot结果显示间歇性低氧组较常氧组凋亡相关蛋白Bax、Caspase3和Caspase9表达显著上调(P<0.05);抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著下调(P<0.05)。MTT实验表明,间歇性低氧组较常氧组肝细胞增殖受到抑制。流式细胞术实验表明,间歇性低氧组较常氧组肝细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。MiRNA-1敲减后MTT实验表明,MiRNA-1敲减后细胞增殖能力明显提升(P<0.05);流式细胞术实验表明,MiRNA-1敲减后细胞的凋亡率显著下降(P<0.05)。Western Blot结果显示MiRNA-1敲减后,促凋亡蛋白和凋亡相关蛋白Bax、Caspase3和Caspase9表达显著下调(P<0.05);抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著上调(P<0.05)。Realtime-PCR结果显示MiRNA-1敲减后促凋亡基因和凋亡相关基因Bax、Caspase3和Caspase9表达显著下调(P<0.05);抗凋亡基因Bcl-2的表达显著上调(P<0.05)。结论:(1)间歇性低氧可以诱导肝脏MiRNA-1的表达增加。(2)MiRNA-1可能通过上调Bax、Caspase-3和Caspase-9及下调Bcl-2蛋白的表达来调控间歇性低氧下肝脏细胞的凋亡,从而引起肝损伤和肝细胞增殖能力的下降。(3)MiRNA-1敲减后,间歇性低氧下肝脏细胞的凋亡减少,细胞增殖能力恢复。
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