芹菜素是治疗乳腺炎要药的重要成分,属实际无毒、无遗传毒性的黄酮类化合物,且拥有较好的抗炎作用;针刺治疗疾病安全方便,该法已经广泛应用于炎症疾病的治疗,但是芹菜素或/和针刺治疗乳腺炎的效果还未见报道。本研究以SD大鼠为试验对象,在建立乳腺炎模型的基础上,对芹菜素或/和针刺对乳腺炎的治疗效果开展体内研究;并分离培养SD乳腺上皮细胞,进一步研究芹菜素对LPS诱导的乳腺上皮细胞炎性损伤的保护作用及机制,以期为临床应用芹菜素和针刺治疗乳腺炎提供科学的试验依据。首先建立SD大鼠乳腺炎模型。30只SD雌鼠于产后72 h随机分为对照组和5个试验组,每组5只,各试验组大鼠经第四对乳头灌注不同剂量LPS(10μg/侧、20μg/侧、30μg/侧、40μg/侧、50μg/侧),对照组灌注等量PBS。灌注后24 h观察各大鼠临床症状、乳腺组织病理学变化。结果发现,试验组大鼠第四对乳腺均可观察到不同程度炎症反应,且与LPS剂量呈依赖关系。结果表明,成功建立LPS诱导哺乳期SD大鼠乳腺炎模型。然后,利用建立的SD大鼠乳腺炎模型,探讨芹菜素、针刺对乳腺炎的治疗效果。将乳腺炎SD大鼠随机分为四组:LPS刺激组(LPS组)、芹菜素治疗组(Api组)、针刺治疗组(Acu组)、芹菜素联合针刺治疗组(Api+Acu组),正常SD大鼠为对照组(Con组),每组5只。在LPS灌注后的24 h开始实施治疗,每天一次,治疗5天,最后一次治疗后的24 h处死大鼠收集乳腺组织。观察乳腺组织的病理学变化;q RT-PCR和ELISA方法检测乳腺组织中TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平;western blot方法检测MPO表达水平和TLR4/NF-κB信号通路情况。结果显示,与LPS组相比,三个治疗组的乳腺组织病变明显减轻,MPO蛋白水平显著降低,TNF-α、IL-1β和IL-6的m RNA和蛋白水平均显著降低,且TLR4/NF-κB信号通路的激活被显著抑制。以上结果说明芹菜素、针刺能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路来治疗LPS引起的SD大鼠乳腺炎。最后,分离培养SD大鼠乳腺上皮细胞,研究芹菜素对LPS诱导的乳腺上皮细胞炎性损伤的保护作用和机制。MTT法检测芹菜素对大鼠乳腺上皮细胞的毒性作用,q RT-PCR和ELISA方法检测芹菜素对大鼠乳腺上皮细胞中TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平的影响。western blot和IIF法检芹菜素对SD大鼠乳腺上皮细胞中TLR4/NF-κB信号通路的影响。结果显示,芹菜素在1~10μg/m L的浓度下无细胞毒性作用;和LPS组相比,芹菜素预处理细胞能够显著降低TNF-α、IL-1β和IL-6的m RNA和蛋白水平;western blot结果显示芹菜素是通过抑制乳腺上皮细胞中TLR4/NF-κB信号通路的激活而发挥其抗炎作用的,IIF法检测结果证明,芹菜素可抑制p65的磷酸化及转移入核。本试验对芹菜素、针刺治疗乳腺炎的效果和作用机理进行了初步探索性研究,发现芹菜素、针刺能使TLR4的表达下调并对下游NF-κB信号通路的激活起到抑制作用,最终使乳腺中TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA和蛋白表达水平均显著下降。