高原鼢鼠(Myospalax bailey)是青藏高原特有的物种之一,血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF)具有促进毛细血管增生的功能,动物组织微血管密度(Microvessel density, MVD)的大小与其对低氧的适应能力有关。为了研究高原鼢鼠对高原环境的适应机制,通过分子克隆及生物信息学方法测定并分析了高原鼢鼠VEGF的cDNA序列。根据VEGF基因结构特点,设计特异性表达VEGF各亚型的探针,应用Real-time PCR测定不同海拔高原鼢鼠骨骼肌内VEGF各亚型mRNA表达水平。通过免疫组织化学方法对不同海拔高原鼢鼠骨骼肌微血管密度进行测定,并运用SPSS17.0软件对MVD和各VEGF亚型基因表达量之间进行相关性分析。
　　结果:获得的VEGF编码区为645bp,其序列与高原鼠兔VEGF189、大鼠和小鼠VEGF188cDNA序列的同源性分别为92.1％、93.6％和93.8％。该序列编码蛋白长度为214个氨基酸,在N端包含一个26个氨基酸的信号肽,成熟的蛋白具有188个氨基酸,为VEGF188亚型。高原鼢鼠VEGF188与高原鼠兔VEGF189、大鼠和小鼠VEGF188的同源性分别为90.2％、94.9％和94.4％。高海拔高原鼢鼠骨骼肌MVD(1107.47±47.98)显著高于低海拔高原鼢鼠(918.74±54.10)(P＜0.05)。高原鼢鼠骨骼肌VEGF亚型主要组成为VEGF188、VEGF164和VEGF120。4200m海拔的高原鼢鼠骨骼肌中总量VEGF、VEGF188、VEGF164 mRNA表达量(分别为1.27±0.24,1.22±0.13,1.47±0.24)显著高于3200m海拔高原鼢鼠表达量(分别为0.90±0.10,0.66±0.14,0.94±0.17)(P＜0.05),VEGF120 mRNA表达量(4200m海拔为0.58±0.11,3200m海拔为0.67±0.12)没有显著变化。VEGF164与MVD显著相关(P＜0.05)。
　　以上结果表明,高原鼢鼠骨骼肌VEGF亚型组成以VEGF164为主,VEGF164基因是促进毛细血管增生作用的主要形式。VEGF188、VEGF164和VEGF120对低氧的敏感程度不同,他们的对低氧敏感程度依次降低。