近年来,延长治疗性抗体半衰期已成为抗体工程改造的重点。抗体半衰期的延长不仅可以提高药效,减少给药频率,而且可以降低治疗费用。利用Fc基因改造以提高抗体和人新生儿Fc受体(hFcRn)亲和力的方法已被广泛应用于延长抗体的半衰期。然而,同一 Fc的有效突变改造对于不同抗体,半衰期的延长效果会有差异。本研究拟通过对不同已报道的Fc有效突变的筛选,获得能够延长HBV治疗性人源化抗体huE6F6体内半衰期的Fc改造抗体。主要研究内容包括以下三部分:第一,Fc改造抗体的表达与性质分析。本研究选用三种已报道能够提高抗体半衰期的Fc突变组合,分别构建并表达了 huE6F6-YTE(M252Y/S254T/T256E)、huE6F6-QL(T250Q/M428L)和 huE6F6-LS(M428L/M434S)改造抗体。通过DSC测定热稳定性发现,改造抗体与野生型抗体的Tml值在60℃以上,Tm2值保持同一水平,在81℃～82℃之间,表明改造抗体构象基本稳定。改造抗体的HBsAg结合活性检测表明Fc区域的点突变并不影响抗体原有的抗原特异性。初步比较了这三株改造抗体与hFcRn受体分子的pH依赖结合活性,其中huE6F6-YTE在pH 6.0的条件下提高了约60倍,同时能够保持pH依赖性;而另外两个改造抗体的结合活性提高倍数在10倍以内,pH依赖性并不明显。第二,基于细胞的改造抗体与FcRn结合活性检测。通过构建稳定表达EGFP-hFcRn的MDCK细胞株,采用pH 6.0条件下与人IgG竞争结合细胞上hFcRn受体的方式比较了各个改造抗体的结合效果,发现huE6F6-YTE改造抗体结合能力最强。由此确定以huE6F6-YTE作为后续动物体内半衰期效果评估的候选分子。第三,评估huE6F6-YTE在实验动物体内的半衰期以及抗原清除效果。结果显示,huE6F6-YTE在hFcRn转基因小鼠和食蟹猴体内的半衰期分别为野生型的1.5倍和2.5倍。huE6F6-YTE在HBV转基因小鼠体内的抗原清除程度不及野生型抗体,但是持续时间较长,达到4天左右。在食蟹猴体内HBsAg清除效果测试中,huE6F6-YTE注射组食蟹猴体内的抗原半衰期是huE6F6-WT注射组的4倍,而huE6F6-YTE的抗体半衰期为huE6F6-WT的1.5倍。总之,本研究通过Fc改造成功获得半衰期显著改善的HBV治疗性抗体,对治疗慢性乙型肝炎的临床前研究具有重要意义。