柑橘酸腐病菌（Geotrichum citri-aurantii）是柑橘采后病害最重要的病原真菌之一。目前我国用于防治柑橘采后病害的主要杀菌剂咪鲜胺和抑霉唑均对其防效不佳,只有双胍三辛烷基苯磺酸盐（百可得）对柑橘酸腐病具有较高的防效,柑橘酸腐病防治中存在单一药剂长期使用的问题。因此,研究双胍三辛烷基苯磺酸盐的作用机制,评估其抗性风险,对延缓双胍三辛烷基苯磺酸盐抗药性的发展、延长其使用寿命具有重要意义。本论文在生理生化水平上探索了双胍三辛烷基苯磺酸盐对柑橘酸腐病菌的作用机制,评估了病原菌对药剂的抗药性风险,探讨了抗药机制。主要研究结果如下:（1）相对敏感性基线的建立:2018-2020年从湖北武汉和宜昌、浙江台州和温州、江西赣州、重庆奉节的柑橘产区采集分离到207株柑橘酸腐病菌分离株。测定了双胍三辛烷基苯磺酸盐对这些菌株的有效中浓度(EC50),根据EC50值不连续分布的特点,将EC50＞1.0μg/m L的14（6.76%）株认定为抗性菌株,EC50＜0.5μg/m L的193株认定为敏感菌株,敏感菌株平均EC50值为0.0925±0.0554μg/m L（SD）,作为柑橘酸腐病菌对双胍三辛烷基苯磺酸盐的敏感性基线的参考值。（2）生理生化水平上作用机制的探索:马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）中的双胍三辛烷基苯磺酸盐使柑橘酸腐病菌菌丝末端分支减少,使节孢子细胞膜受到破坏,低浓度（0.06μg/m L）延缓节孢子的萌发,高浓度（0.12μg/m L）抑制节孢子萌发。含双胍三辛烷基苯磺酸盐PDA上产生的节孢子再次接触该药剂时的生长速率和致病力降低。PDA中双胍三辛烷基苯磺酸盐浓度为0.12μg/m L时,与对照相比,菌丝中超氧根阴离子（O2-）的含量升高38.9%（P=0.008）,过氧化氢（H2O2）含量升高不显著,超氧化物歧化酶（SOD）活性上升131.79%（P＜0.001）,过氧化物酶（POD）活性下降59.7%（P＜0.001）。另外,双胍三辛烷基苯磺酸盐（0.12μg/m L）还会使菌丝体中总脂质的含量降低31.6%（P=0.028）,麦角甾醇含量下降不显著（P=0.052）,说明双胍三辛烷基苯磺酸盐的作用机制之一可能是抑制了除麦角甾醇之外的其它一种或多种脂质的生物合成。（3）抗性风险评估:紫外诱变与药剂驯化结合诱导10株敏感出发菌株,共获得7株抗性突变体,其中5株抗性倍数＜100,2株抗性倍数分别达到152.4倍和363.9倍。将田间抗性菌株、抗性倍数最高的突变体各三株在不含药PDA上连续转接10代后,发现田间抗性菌株的抗性能稳定遗传,突变体EC50平均值从20.689μg/m L下降至9.590μg/m L。在适合度方面,与敏感菌株相比,三株抗性突变体在不含药PDA上的生长速率平均降低21.9%,单位面积节孢子产量平均降低40.7%,而三株田间抗性菌株无明显下降。交互抗药性实验表明,双胍三辛烷基苯磺酸盐与丙环唑（r=0.143,P=0.570）、叶菌唑（r=0.263,P=0.291）和氟啶胺（r=-0.098,P=0.699）均无交互抗性。因此我们推断,柑橘酸腐病菌对双胍三辛烷基苯磺酸盐的抗性风险为低至中等。（4）代谢相关基因的表达分析:利用q RT-PCR测定了双胍三辛烷基苯磺酸盐处理前后,田间抗性菌株、诱导抗性突变体及其亲本敏感菌株各三株的一个ATP-binding cassette（ABC）和六个Major facilitator superfamily（MFS）转运蛋白基因的相对表达量。对于未接触药剂的菌丝,与敏感菌株相比,抗性突变体的ABC基因（EVM0003677,P=0.013）和三个MFS基因（EVM0000087,P=0.006和EVM0003101,P=0.021）表达上升显著;对于用药处理后的菌丝,与敏感菌株相比,抗性突变体和田间抗性菌株的所测七个转运蛋白基因的表达均没有明显升高。因此,柑橘酸腐病菌对双胍三辛烷基苯磺酸盐的抗性与这七个转运蛋白基因的表达无关。