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家蚕追寄蝇(Exorista sorbillans)寄生于家蚕幼虫体壁与肌肉间引起的多化性蚕蛆病对蚕业生产危害极大。近几十年来,关于家蚕追寄蝇的研究多集中在生物学和防治等方面,对家蚕追寄蝇寄生后的家蚕体内生理生化变化方面研究较少,从分子水平上探究家蚕追寄蝇寄生对家蚕生长与发育进程和分子免疫应答机制更是空缺,因此本文主要从核酸和蛋白质水平研究蝇蛆寄生后对家蚕生长发育与分子免疫的影响,以期阐述寄生后的家蚕生长发育、免疫应答等生物学问题,寻找家蚕蝇蛆病防治的切合点,为提高蚕桑生产的经济效益和抗病育种等提供重要的参考。研究结果如下:1、家蚕追寄蝇寄生对家蚕危害调查及寄生部位观察追寄蝇寄生后家蚕的死亡率调查结果显示,4龄初期和5龄初期寄生的家蚕大部分死亡,4龄3天、5龄3天和5龄4天寄生的家蚕死亡率显著降低。观察并记录了家蚕追寄蝇寄生蚕体后寄生部位随发育时间的变化而呈现的不同特征。对即将出蛆的蚕体进行解剖,可观察到寄生在蚕体内的蛆;羽化后的解剖观察,发现包裹物(体)将寄生的蛆体包围并致其死亡。2、家蚕追寄蝇寄生蚕体血液的蛋白组学研究5龄第1天的家蚕被追寄蝇寄生后,对5龄第4天、5龄第6天、化蛹第2天、化蛹第4天和化蛹第6天寄生家蚕血液和正常情况下对应时期家蚕血液进行了SDS-PAGE电泳,结果显示:化蛹第2天的家蚕血液蛋白组分和其他时期相比变化显著,且在这个时期家蚕停止食桑,家蚕追寄蝇和家蚕生长发育所需的能源物质均来自家蚕本身储存的能源物质。因此采用被寄生的家蚕化蛹第2天和正常情况下对应时期的家蚕血液为材料,构建了寄生组和对照组血液的双向电泳图谱,应用质谱技术成功鉴定的差异蛋白点有49个,其中上调表达的有35个蛋白点,下调表达有14个蛋白点,在上调表达的蛋白质中,有3个与家蚕免疫相关的蛋白质—肽聚糖识别蛋白-S1、C-型凝集素-10和酚氧化酶-2;下调表达的蛋白质中有与家蚕生长发育相关的蜕皮激素调节蛋白前体。研究结果表明,当追寄蝇寄生于蚕体后激活了家蚕的先天免疫系统,同时也影响了家蚕的生长发育。利用GO分类对鉴定到的蛋白进行功能分析:49个蛋白质中37个蛋白质获得至少一个GO号,这些蛋白质被分为三大类,主要参与细胞成分、分子功能和生物过程。对这些蛋白质进行KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)pathway分析,他们主要分为代谢,遗传信息处理,环境信息处理,细胞过程,有机体系统和人类疾病五大类。它们具体主要参与蛋白吸收和消化、碳水化合物代谢、解毒代谢及免疫反应过程等。3、实时荧光定量PCR验证分析对于双向电泳得到的差异蛋白,我们选取了几个关键蛋白—肽聚糖识别蛋白-S1、C-型凝集素-10和酚氧化酶-2和蜕皮激素调节16kDa蛋白前体,运用生物信息学方法结合家蚕全基因组数据、基因芯片数据,对以上差异蛋白及其基因进行了分析,并利用荧光定量PCR的方法对其进行了验证。结果显示:只有酚氧化酶-2没有信号肽序列,以上四个基因均在脂肪体内高量表达;被追寄蝇寄生后家蚕的肽聚糖识别蛋白-S1、C-型凝集素-10和酚氧化酶-2三个基因的表达量均增加,而蜕皮激素调节蛋白前体基因的表达量下降,实验结果证实了这些蛋白在转录水平的调节变化与翻译水平的变化是基本一致的,即与双向电泳所得的结果是一致的。