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目的:根据国内外研究进展,以中医药理论为指导,运用现代血清药理学方法、ELISA、流式细胞及细胞体外培养等技术研究复方扶正中药影响急性髓系白血病完全缓解期(AML-CR)患者骨髓CD34+细胞源树突细胞(DC)的机制,通过检测扶正汤干预AML-CR患者骨髓CD34+细胞源DC诱导过程中白介素-2(IL-2)和可溶性白介素-2受体(sIL-2R)在血清中的变化情况,探讨IL-2和sIL-2R与DC的相关性以及复方扶正中药影响AML-CR患者骨髓CD34+细胞源DC的可能机制。 方法:予扶正汤以高、中、低三组不同浓度剂量分早晚两次给新西兰大白兔灌胃,并设置空白组,此组无需用药、正常喂养,第三天在无菌条件下行兔心脏取血制备含药兔血清及正常兔血清备用。抽取AML-CR骨髓并以肝素钠管收集,在无菌操作台中通过FICOLL梯度离心法分离骨髓单个核细胞,继予CD34+免疫磁珠提纯得到CD34+细胞,使用Flt-3、IL-3、TPO、SCF细胞因子体外扩增6-9天,使CD34+细胞呈对数生长后进入DC诱导。将扩增后的CD34+细胞以不同浓度含药兔血清、正常兔血清配入GM-CSF、IL-4、IFN-α、TNF-α进行体外DC诱导,并设单纯细胞因子组对照,于诱导的第0、6、9天取上清液并用ELISA检测法对上清液中IL-2及sIL-2R的含量进行检测,并在第9天使用流式细胞仪检测DC表面抗原CD80、CD83、CD86、CD1a、HLA-DR的表达。 结果:1.DC形态:通过显微镜观察发现各组的CD34+细胞随时间变化逐渐向四周出现突起呈树枝状,大部分成簇形成集落,但含药血清+细胞因子组形态比正常血清+细胞因子组及单纯细胞因子组相比更加典型且数目更多,而正常血清+细胞因子组与单纯细胞因子组无明显区别。 2.DC的表型:经CD34+细胞诱导后DC表面抗原CD80、CD83、CD86、CD1a、HLA-DR在各组中均可表达。其中CD80表面抗原在各组中的表达均无明显差异(P>0.05);含药血清+细胞因子组中CD83、CD86、HLA-DR及CD1a表达较正常血清+细胞因子组、单纯细胞因子组高,有统计学意义(P<0.05);正常血清+细胞因子组、单纯细胞因子组之间比较无差别(P>0.05);CD1a在高剂量组中的表达高于中剂量组、低剂量组及正常血清+细胞因子组、单纯细胞因子组,有统计学意义(P<0.05),中剂量组表达高于低剂量组有统计学意义(P<0.05);CD83在高剂量组中的表达高于中剂量组、低剂量组及正常血清+细胞因子组、单纯细胞因子组,有统计学意义(P<0.05),中剂量组表达高于低剂量组有统计学意义(P<0.05);CD86在高剂量组与中剂量组的表达无明显差异(P>0.05),高剂量与中剂量的表达均高于低剂量(P<0.05);HLA-DR高剂量组表达高于中剂量组有统计学意义(P<0.05),而与低剂量组无明显差异(P>0.05),低剂量组表达高于中剂量组有统计学意义(P<0.05)。 3.IL-2及sIL-2R水平:组间比较,同一时间含药血清+细胞因子组中IL-2含量明显高于正常血清+细胞因子组及单纯细胞因子组(p<0.05),且高剂量含药血清+细胞因子组中IL-2的含量最高(p<0.05),中剂量+细胞因子组与低剂量+细胞因子组相比无明显差异(p>0.05),而正常血清+细胞因子组与单纯细胞因子组相比差异不明显(p>0.05);第0天各组中sIL-2R含量无明显差异(p>0.05),第6、9天含药血清+细胞因子组明显低于正常血清+细胞因子组及单纯细胞因子组(p<0.05),且高剂量含药血清+细胞因子组中sIL-2R的含量最低(p<0.05),而含药血清中剂量组与低剂量组相比无明显差异(p>0.05),正常血清+细胞因子组与单纯细胞因子组之间比较差异不明显(p>0.05)。组内比较,随着时间进展各组IL-2含量逐渐增多(p<0.05),sIL-2R在各含药血清+细胞因子组、正常血清+细胞因子组及单纯细胞因子组中逐渐降低(p<0.05)。 结论:1.扶正汤含药血清能促进AML-CR患者CD34+细胞源DC的成熟。 2.扶正汤含药血清在诱导AML-CR患者CD34+细胞源DC的形成及成熟过程中能够促进IL-2的分泌,同时抑制sIL-2R的分泌,促进DC发挥生物学效应。