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龙眼为非跃变型果实,一般认为,乙烯不参与非跃变果实成熟衰老,但近期的研究表明,乙烯与非跃变型果实成熟也存在某种关系。ACC合成酶(ACS)、ACC氧化酶(ACO)是乙烯生物合成途径中的两个关键酶,与乙烯生物合成密切相关。本试验以石硖龙眼果实为材料,在分离乙烯生物合成相关酶基因ACS和ACO基因的基础上,研究这两个基因在果实发育过程中的表达,外源ABA、乙烯利留树处理对这两个基因表达特性的影响及其与乙烯释放的关系,以及两基因在龙眼不同组织器官内的表达差异,试图阐明ACS和ACO基因表达特性与龙眼果实发育及成熟的关系。研究结果表明:
1、以龙眼果实的cDNA为模板,设计ACS和ACO基因的兼并引物,采用RT-PCR并结合RACE方法,分别得到ACS、ACO cDNA的各一个全长序列,分别命名为Dl-ACS1,Dl-ACO1。其中,DI-ACS1共1889个核苷酸,其中编码区1458个,5’端不翻译区域包含37个碱基,3’端不翻译区域包含395个,由起始子Met到终止子Tag,共编码了486个氨基酸,推测其蛋白质的等电点为5.55,分子量为54.42KDDL-ACS1463个核苷酸,其中编码区945个,5’端不翻译区域包含183个碱基,3’端不翻译区域包含335个,由起始子Met到终止子Tag,共编码了315个氨基酸,推测其蛋白质的等电点为5.80,分子量为36.15KD。
2、龙眼果实在整个发育过程中,果实乙烯释放量和呼吸强度在幼果时较高,随着果实的生长两者逐渐降低,在果实发育后期乙烯释放量和呼吸强度均维持在较低的水平。在果实发育前期(约花后第6周),龙眼果实乙烯释放量和呼吸强度有一个高峰。
随着果实的生长发育,Dl-ACS1在果皮中的表达有一个先升后将的趋势,在果肉中,发育前期表达较强,随着果实发育,逐渐降低,到果实发育后期(花后13周)检测不到Dl-ACS1的表达;Dl-ACO1在果实整个发育过程中,在果皮中的表达变化趋势与Dl-ACS1一致,在果肉中,幼果期表达较强,随果实的发育慢慢降低,接近成熟时略有增强。
果皮中的Dl-ACS1、Dl-ACO1表达最强时期为龙眼果实发育中期(约花后第11周);而果肉中的表达最强的时期则在龙眼果实发育前期(约花后第7周)。
3、分别在花后12周(采收前5周,生理成熟前期)和花后15周(采收前2周,生理成熟期)采用外源ABA和乙烯利对果实进行留树浸泡处理,总体来说,两种处理都促进了龙眼果实中乙烯的生物合成和呼吸强度的增强,但对呼吸强度的促进作用较弱,比较两次处理,外源ABA、乙烯利留树处理对花后12周的果实内源乙烯生成的促进作用较大。
(1)花后12周时处理:
花后12周处理,果皮中,ABA、乙烯利处理均促进了Dl-ACS1和Dl-ACO1的表达,其中乙烯利处理对两个基因的促进作用较ABA处理强。
果肉中,外源ABA、乙烯利处理后,没有诱导Dl-ACS1的表达,却检测到外源ABA、乙烯利处理促进了龙眼果实果肉中Dl-ACO1的表达,与皮中相似,乙烯利处理对Dl-ACO1表达的促进作用较强。
(2)花后15周时处理:
与花后12周处理相类似,花后15周时处理,外源ABA对果皮中Dl-ACS1和Dl-ACO1的表达的作用不明显,乙烯利处理也促进了果皮中Dl-ACS1和Dl-ACO1的表达。
果肉中,外源ABA和乙烯利对Dl-ACS1和Dl-ACO1表达的影响类似,两种均不能诱导果肉中Dl-ACS1的表达,但均促进了Dl-ACO1表达。
4、龙眼不同组织、器官中Dl-ACS1、D1-ACO1表达情况不同Dl-ACS1、D1-ACO1在根、茎、叶中的表达存在明显的组织差异性。在根中,Dl-ACS1表达较强,而几乎检测不到Dl-ACO1的表达。Dl-ACS1在老茎、幼叶中较幼茎、老叶中强,Dl-ACO1恰好相反,其在幼茎、老叶中的表达较在老茎、幼叶中强。