本试验采用胶原酶消化法分别从猪背部皮下、腹部皮下和腹腔内的脂肪组织分离了脂肪前体细胞，同时从背最长肌肌肉组织中分离了脂肪前体细胞，首次建立了猪肌内脂肪前体细胞的培养体系。采用含5％血清的DMEM／F12完全培养液进行培养，用MTT法检测了脂肪前体细胞的增殖情况。采用含850nM胰岛素和50nM地塞米松的完全培养液诱导细胞分化，通过油红O提取法测定了细胞分化过程中甘油三酯含量，并采用放射免疫测定法测定了脂肪前体细胞分化过程中分泌leptin的变化。为了研究脂肪前体细胞分化过程中聚脂相关基因的表达模式，采用实时荧光定量RT-PCR方法检测了猪脂肪前体细胞分化过程中转录调控因子基因(PPARY、C／EBPβ与SREBP-1)、脂肪合成相关酶相关基因(GPDH、FAS、ACC和SCD-1)、脂肪酸转运相关基因(LPL、AP2、FAT、FATP-1与VLDLR)以及其它相关基因(ACVR2B、IL-6R、IL-15R和IGF-1R)的表达模式。 研究结果表明： 1．猪皮下脂肪和腹腔内脂肪组织经0．1％的I型胶原酶消化60～70min，背最长肌肌肉组织经0．2％的II型胶原酶消化2h并进行差速贴壁，均可分离到脂肪前体细胞；用含850nM胰岛素和50nM地塞米松的完全培养液诱导后，脂肪前体细胞聚脂分化为成熟脂肪细胞。 2．猪皮下和肌内脂肪前体细胞的倍增时间分别为53．3h和50．2h；脂肪前体细胞经诱导后，细胞内甘油三酯含量不断增加，其中腹部皮下脂肪前体细胞甘油三酯含量增加最为缓慢，背部皮下和肌内脂肪前体细胞次之，腹腔内脂肪前体细胞则相对较快，提示肌内脂肪前体细胞的增殖和分化能力均强于皮下脂肪前体细胞。 3．肌内脂肪前体细胞培养液中的leptin浓度在细胞诱导分化后72h至144h呈现不断上升的趋势，196h出现下降，而240h后又再次上升，并显著高于72h水平(P<0．05)。背部皮下和腹腔内脂肪前体细胞则在96h达到高峰，之后下降，至192h降至最低水平，240h虽然略有回升，但差异不显著(P>0．05)。表明分化成熟的肌内脂肪细胞具有较强的leptin分泌能力，但在分化过程中leptin分泌不均一，呈现波动的变化。 4．转录调控因子C／EBPl3和PPAR7均在脂肪前体细胞的分化早期迅速表达，但在皮下和肌内脂肪前体细胞中的表达模式存在差异，其中PPAR~mRNA在肌内脂肪前体细胞诱导分化后96h和144h的表达量显著高于皮下脂肪前体细胞，并且与脂肪合成酶相关基因SCD-1以及脂肪酸转运相关基因LPL、aP2、FAT和FATP-1的表达呈现极强的相关性，提示在离体培养条件下肌内脂肪前体细胞可能比皮下脂肪前体细胞具有更强的分化能力；另一转录因子基因SREBP-1在皮下脂肪前体细胞分化过程中的表达呈现先升高、后回落的趋势，其表达模式与脂肪生成酶基因ACC、FAS、GPDH、SCD-1以及脂蛋白脂酶(LPL)基因的表达类似。SREBP-1在肌内脂肪前体细胞分化过程中的表达呈现不断上升的趋势，并与PPAR~、SCD-1和LPL的表达显著相关，提示SREBP-1对猪脂肪前体细胞的分化具有调控作用。 5．皮下脂肪前体细胞中脂肪酸合成相关基因ACC、FAS、GPDH和SCD-1的表达在前期升高，在后期降低，而脂肪酸跨膜转运基因除LPL外，aP2、FAT、FATP-1和VLDLR盼表达均在细胞分化过程中呈现不断升高的趋势，推测猪皮下脂肪在聚脂早期是以细胞自身合成脂肪酸占主导，而在聚脂后期则主要依赖外源性脂肪酸的跨膜转运。肌内脂肪前体细胞中脂肪酸合成相关基因SCD-1和脂肪酸跨膜转运基因LPL、aP2、FAT和FATP-1mRNA的表达均表现为不断上升的趋势，并且在后期的表达量要高于皮下脂肪前体细胞，表明肌内脂肪前体细胞的脂肪酸合成和脂肪酸跨膜转运能力均要强于皮下脂肪前体细胞。此外，SCD-1在肌内脂肪前体细胞的高水平表达表明肌内脂肪前体细胞的不饱和脂肪酸合成能力比皮下脂肪前体细胞要强。 6．ACVR2B、IL-15R和IL-6RmRNA的表达在皮下脂肪前体细胞分化后均有显著的下调，但在肌内脂肪前体细胞的表达模式与皮下脂肪前体细胞有很大差异，ACVR2B和IL-6R在诱导后不断上调；IL-15R在诱导后12h有上升趋势，之后逐渐下降。提示在动物体内肌内脂肪的出现晚于皮下部位的部分原因可能与肌内脂肪组织在分化过程中受到肌肉分泌的不同因子的抑制有关(早期可能是IL-15，后期可能是Myostatm、IL-6等)。此外，IGF-1R在皮下和肌内脂肪前体细胞分化过程中mRNA的表达也呈现出不同的趋势，表明皮下和肌内脂肪前体细胞的分化可能存在不同的调控机制。