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目的:探讨慢病毒介导的生长抑制因子ING4过表达对乳腺癌细胞迁移、侵袭的作用及其机制。方法:(1)以携带人源化ING4编码序列(CDS)的pAdTrack-CMV/ING4质粒为模板,利用ING4特异性引物(ING4-F:5’-gaa gct agc gcc acc atg gct gct ggg atg tat ttg-3’;ING4-R:5’-ata ggc gcg ccc tat ttc ttc ttc cgt tct tg-3’)通过PCR扩增获得ING4 CDS片段。(2)在GFP标记的p Lenti6.3/IRES/GFP慢病毒质粒的NheI和Sgs I限制性酶切位点之间插入ING4目的片段构建ING4重组慢病毒质粒pLenti6.3/ING4/IRES/GFP,并通过PCR、双酶切、DNA测序鉴定。(3)用脂质体Lipofectamine2000将构建正确的pLenti6.3/ING4/IRES/GFP及其对照pLenti6.3/IRES/GFP慢病毒质粒分别与辅助包装质粒pLP1、p LP2、VSVG共转染293T人胚肾细胞包装GFP标记的ING4重组慢病毒(LV-ING4)及其对照空病毒(LV),并将慢病毒培养上清高速离心浓缩后,用有限稀释法根据GFP的表达进行滴度测定。(4)LV-ING4、LV分别用10MOI的最佳感染剂量感染MDA-MB-468三阴性乳腺癌细胞,通过10μg/ml的灭瘟素(BSD)筛选后获得MDA-MB-468-LV-ING4(简写为MDA-MB-468-ING4)、MDA-MB-468-LV(简写为MDA-MB-468-Mock)。荧光显微镜、流式细胞仪检测GFP分析转基因效率,及RT-PCR、Western blot检测慢病毒介导ING4在MDA-MB-468细胞中的表达。(5)采用Transwell迁移、侵袭实验检测MDA-MB-468-ING4、MDA-MB-468-Mock乳腺癌细胞的迁移、侵袭能力,分析慢病毒介导的ING4过表达对MDA-MB-468三阴性乳腺癌细胞迁移、侵袭的作用。(6)利用Western blot检测MDA-MB-468-ING4、MDA-MB-468-Mock乳腺癌细胞上皮间充质转化(EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Snail1、Snail2、Zeb1、Zeb2、Twist1、Twist2)的表达,分析慢病毒介导的ING4过表达抑制MDA-MB-468三阴性乳腺癌细胞迁移、侵袭的分子机制。结果:(1)成功制备了表达人源化ING4的GFP标记重组慢病毒(LV-ING4)。(2)成功构建了慢病毒介导的ING4转基因MDA-MB-468三阴性乳腺癌细胞。(3)慢病毒介导的ING4过表达能够明显抑制MDA-MB-468三阴性乳腺癌细胞的迁移、侵袭能力,MDA-MB-468-ING4较MDA-MB-468-Mock的相对迁移、侵袭力分别为45.7%、36.8%。(4)ING4能够明显下调MDA-MB-468三阴性乳腺癌细胞Snail1、Snail2 EMT诱导转录因子(EMT-TFs)和N-cadherin间充质标志物及上调E-cadherin上皮标志物,而对Zeb1、Zeb2、Twist1、Twist2 EMT-TFs几乎无影响。结论:慢病毒介导的ING4过表达能够下调Snail1、Snail2 EMT-TFs逆转EMT的方式抑制乳腺癌转移。