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目的:观察机体死后角膜内皮在不同死亡间隔和温度下结构和功能的改变并探究机体死后角膜内皮细胞的存活机制。方法:C57BL/6小鼠脱颈处死后,尸体分别置于4℃冰箱中和25℃室内,放置12h、24h、48h、72h。在不同的死亡间隔(PMI)下,对小鼠眼前节进行裂隙灯检查,抽取房水做细菌培养;通过眼球石蜡切片苏木素-伊红(HE)染色、角膜内皮N-cadherin和Na+-K+-ATPase免疫荧光染色、角膜内皮扫描电镜(SEM)来观察角膜内皮结构和功能的改变;利用Live and dead染色评估角膜内皮活细胞率并通过标记凋亡细胞的TUNEL染色和程序性坏死标记物P-RIP3(the receptor-interacting protein family)的免疫荧光染色对细胞的死亡方式进行探究。利用转录组测序技术(RNA-seq)及 quantitative Real-time RT-PCR(q-RT-PCR)来检测机体死后12h兔角膜内皮基因表达谱的变化。通过腹腔注射治疗性TNF-α抗体,依那西普,观察其对死后小鼠角膜内皮的保护作用。结果:小鼠死后,低温维持了眼球的正常形态和一定的前房深度以及前房的无菌状态,至死后48h角膜内皮仍能保持较好的形态和活性;而常温下,仅至死后12h角膜内皮维持了良好的形态和活性,至24h前房即消失,至48h房水中开始出现细菌。转录组测序结果显示,低温环境下的兔角膜内皮中一些发育相关基因表达上调;而在常温环境下,细胞凋亡的负调控基因上调,同时,TNF-α信号通路下游多个基因表达上调。注射抗TNF-α抗体依那西普可改善死后角膜内皮的损伤。结论:低温有效地延缓了机体死后角膜内皮的损伤,提高了角膜内皮细胞的存活率。我们的研究证明TNF-α信号通路参与了常温下机体死后角膜内皮的损伤。我们的研究结果为眼库合理利用供体角膜组织提供了有价值的信息,并为角膜内皮组织工程提供了新的思路和方向。