拟南芥镁敏感突变体CIPK蛋白质组分析

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本研究以拟南芥镁敏感突变株CIPK3/9/23/26和野生型Col0的叶片为材料研究突变株和野生型拟南芥蛋白质的差异表达。本文比较了两种高丰度蛋白的去除方法;采用蛋白质组学的研究方法,分析了拟南芥突变株CIPK3/9/23/26和野生型Col0的叶片的差异蛋白,并对差异蛋白进行了相关的质谱鉴定,所得结果为全面了解二者之间的差异蛋白以及它们之间的作用钙信号sensor蛋白CIPK蛋白激酶的可能作用靶蛋白质提供了数据参考。由于叶片中Rubisco蛋白的比例较高,在蛋白质组学研究中高丰度蛋白的存在会干扰低丰度蛋白质的呈现,干扰在双向凝胶电泳的分辨率并从而影响蛋白质鉴定的准确性。因此为了更好的进行拟南芥叶片蛋白质组学的研究,提高双向凝胶电泳的分辨率,剔除Rubisco蛋白是非常必要的。首先进行拟南芥叶片蛋白质提取优化。本实验采用PEG预分离法结合TCA/丙酮和PEG预分离法结合SDS/酚两种方法进行高丰度蛋白Rubisco的去除。发现使用PEG预分离法结合TCA/丙酮的蛋白条带更为清晰,对高丰度蛋白的去除效果更好。结论PEG预分离法结合TCA/丙酮有较好的去除效果。利用优化的PEG预分离法结合TCA/丙酮提取方法对拟南芥CIPK突变株和野生型Col0进行蛋白质的提取,所提取的蛋白质利用双向电泳技术分离。所获得的凝胶图谱扫描,利用ImageMaster软件分析寻找差异表达蛋白质,所获得的差异蛋白质质谱鉴定;通过差异蛋白质组研究寻找钙信号sensor蛋白CIPK蛋白激酶的可能作用靶蛋白质。野生型和突变型之间有30个差异点,对这些差异蛋白点进行了质谱分析,最终鉴定了17个蛋白质。其中包括脂转运相关蛋白质,丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,抗性蛋白质,蛋白酶抑制因子,微管相关的蛋白质,质体转录激活因子3,质体蓝素蛋白超家族蛋白,50S核糖体蛋白L23,磷酸核糖异构酶,类动蛋白质,翻译起始因子,ATP合成酶和蛋白质二硫化物异构酶。
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