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香蜂草(Melissa Officinalis)是唇形科蜜蜂花属多年生草本植物,原产于地中海沿岸,主要产地在法国。古代医书记载他的作用包括理气、解郁、祛风、发汗、退热和止痛等,国外常作为温和的镇静剂、解痉剂、抗菌剂被广泛使用。但目前国内外学者对香蜂草特别是其抗抑郁作用的研究非常有限。 目的: 对香蜂草叶进行分离、提纯并鉴定其化学活性成分,探讨香蜂草叶不同粗提取物对绝望行为抑郁小鼠的影响作用。 方法: 1.将阴干的香蜂草叶用甲醇在室温下进行浸泡提取,将提取液进行减压浓缩,然后用石油醚、乙酸乙酯和丙酮水进行萃取,进行减压浓缩得到浸膏。浸膏采用葡聚糖凝胶柱色谱、制备薄层色谱、硅胶柱层析及重结晶等方法进行分离和纯化,运用波谱分析(13C-NMR,1H-NMR,MS,IR,X-ray,HRESI-MS,EI-MS)及物理化学性质对其进行直接和间接分析,从而确认化合物的结构。 2.实验分组以及CUMS抑郁模型的建立 选取雄性昆明小鼠60只,所有小鼠采用开场试验进行评估,剔除不合格的小鼠。按照随机抽样的方法分配8只小鼠为空白对照组(A),标准环境饲养。使用CUMS法对其它小鼠建立抑郁模型。造模后随机抽样40只抑郁小鼠,分别为抑郁模型组(B)、氟西汀组(C)、香蜂草叶石油醚提取物组(D)、香蜂草叶乙酸乙酯提取物组(E)、香蜂草叶丙酮水提取物组(F)。 3.行为学评估 采用蔗糖水消耗量实验、开场实验、强迫游泳实验三种方式分别在CUMS刺激前、CUMS刺激第21d,进行干预的第7天后、第14天后评估小鼠的行为学变化。 4.统计方法 实验数据用SPSS19.0软件进行分析。多组计量数据使用单因素方差分析;两两比较时,方差齐时用LSD法检验,两组间均数比较采用独立样本t检验,配对t检验。P<0.05为差异有显著性。 结果: 1.化合物的鉴定结果 香蜂草叶中共分离鉴定了13个化合物,分别为原儿茶醛(1)、三对节酸(2)、香草醛(3)、2α,3β-二羟基乌苏-12-烯-28-酸(4)、乌索酸(5)、齐墩果酸(6)、胡萝卜苷(7)、2α,3β,23,29-四羟基齐墩果-12-烯-28-酸-29-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、木犀草素(9)、迷迭香酸(10)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(11)、β-谷甾醇(12)、十六烷酸(13)。 2.行为学评估结果 CUMS刺激前,各组小鼠的蔗糖水消耗量、开场实验、强迫游泳实验的测量相比差异无统计学意义(P>0.05)。经过21d的CUMS应激后;A组与B组、C组、D组、E组、F组小鼠相比,在蔗糖水消耗量、开场实验、强迫游泳实验的测量上差异均有显著性(P<0.05)。香蜂草提取物干预第7天后,C组、D组、F组小鼠与B组小鼠相比部分行为改善,B组小鼠与E组小鼠相比无显著差异性(P>0.05);干预第14天后,与模型组相比,C组与D组能显著增加小鼠的糖水消耗量和自主活动行为(P<0.01),显著减少小鼠FST中的不动时间,C组与D组比无显著差异性(P>0.05),E组对SPT、OFT和FST的结果无明显影响(P>0.05);F组显著增加小鼠的糖水消耗量和减少小鼠的不动时间(P<0.01),但对行为活动无显著影响。 结论: 从香蜂草中分离得到13个化合物,化合物1-8为首次从该植物中分离得到,化合物1-3、8为首次从该属植物中分离得到;与模型组和氟西汀组相比,香蜂草石油醚提取物有比较明显的抗抑郁作用,香蜂草丙酮水提取物有一定的抗抑郁作用,而香蜂草乙酸乙酯提取物则没有显示出抗抑郁作用。