基于适配体-荧光共振能量转移的微生物检测方法研究

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近几十年来,食品安全问题在世界范围内频频发生,如“德国毒黄瓜事件”、“美国单核细胞李斯特菌事件”等等,微生物污染造成的食品安全问题越来越来受到人们的关注。基于食品安全问题的严峻性和危害性,解决这一问题迫在眉睫。因此,需要快速、准确、高效的微生物检测技术,以便快速检测出食品中的致病微生物,从而有效地控制食源性疾病。光学检测方法作为一种通用的检测方法,它的仪器设备简单、操作简便,具有极高的灵敏度。荧光共振能量转移(FRET)是一种光学现象,它描述了两个荧光分子之间的能量转移现象。当供体荧光分子的发射光谱与受体荧光分子的吸收光谱重叠,并且两个分子的距离在10nm范围内时,就会发生一种非放射性的能量转移现象,即FRET。目前,FRET已经在生物科学的各个领域中得到应用,例如研究蛋白质的空间构象以及结构布局、免疫测定、细胞内离子浓度及动力学特征描述、细胞信号传导等。而基于FRET的光学传感器近年来已经成为一个非常活跃的研究领域。但是利用石墨烯和适配体的FRET检测微生物的报道非常有限。本课题基于FRET效应,分别采用单适配体与多适配体构建了FRET传感器,对微生物的光学检测方法进行了研究。论文的研究内容包括以下几个部分:(1)采用荧光基团标记的核酸适配体作为荧光供体分子,氧化石墨烯(GO)作为荧光受体分子,并且通过对核酸适配体浓度、GO浓度的优化,确定了三种常见的食源性致病菌大肠杆菌,坂琪杆菌,副溶血杆菌的相关检测条件。(2)通过使用与微生物有专一性结合特性的核酸适配体,利用FRET效应,通过检测荧光信号的强度变化,对大肠杆菌O157:H7、副溶血性弧菌和阪崎肠杆菌三种微生物进行了检测。实验中分别使用了单适配体和多适配体对微生物进行检测,比较了单适配体和多适配体的检测效果。结果表明,多适配体的检测灵敏度优于单适配体。
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