H7亚型禽流感病毒在全世界范围内广泛流行,不仅给养禽业带来了巨大的经济损失,而且对人类的健康造成了极大的威胁。2013年H7N9 AIV在上海、安徽两地的流行造成了多人的感染和死亡。H7N9 AIV是一种多元重组病毒,对其致病性起决定性作用的HA基因来自于H7N3亚型。虽然对H7N9亚型病毒进行了广泛研究,但是对提供HA基因的H7N3亚型流感病毒的研究仍然非常有限。本研究以实验室分离、鉴定并纯化的两株H7N3亚型禽流感病毒(AIV)A/ duck/Zhejiang/690/2009(H7N3),以下简称为ZJ690,A/duck/Zhejiang/766/2009/(H7N3),以下简称为ZJ766,为亲本毒,构建反向遗传操作系统。拯救病毒的过程为,提取病毒的RNA,经反转录得到cDNA,通过RT-PCR得到各基因片段,将两株病毒16个基因片段的PCR产物分别插入pBD双向表达质粒。8质粒共转染293T细胞后得到获救病毒,采用血凝实验、RT-PCR及全基因测序进行病毒鉴定。结果表明成功救出两株病毒,获救病毒的序列与亲本毒的序列完全一致,将其命名为R-ZJ690与R-ZJ766。为验证拯救的两株病毒与亲本毒在动物致病性上是否一致,本研究进行了小鼠致病性实验。将拯救的病毒和亲本毒株分别以106EIDso剂量经鼻腔感染6周龄BALB/c小鼠,记录感染后0-14天小鼠体重的变化,并对各脏器的进行病毒分离和滴度测定。结果显示,病毒可以引起小鼠的体重下降,但不造成死亡,小鼠感染后第4天及第6天,仅在小鼠的鼻和肺中分离到病毒,R-ZJ690、R-ZJ766与Z-J690、ZJ766在宿主脏器的分布和量上基本保持一致,表明拯救的两株病毒在小鼠致病性上与亲本毒株一致。本研究为H7亚型AIV的致病机理和跨宿主传播机制等研究奠定了基础。