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涎腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)和舌鳞状细胞癌(tonguesquamous cell carcinoma,TSCC)是口腔颌面部常见的恶性肿瘤。腺样囊性癌具有很强的侵袭性,极易侵袭神经并循神经扩散,另外腺样囊性癌远处转移发生率较高,转移部位尤以肺部最常见。腺样囊性癌短期预后较好,但远期生存率显著降低。腺样囊性癌的这些临床特点与它独特的生物学特性密切相关,为此,国内外学者把对腺样囊性癌探索的突破点聚集到腺样囊性癌嗜神经侵袭特性和肺高转移特性的机制研究两大热门课题上,以期为指导临床治疗、提高生存率和生存质量提供理论依据。
舌鳞状细胞癌恶性程度较高,目前化疗是中晚期舌鳞癌治疗的常规治疗方法,在舌鳞癌综合治疗中仍然占有重要地位,但临床上经常观察到大部分晚期舌鳞癌患者化疗后肿瘤有所缩小,但之后反弹明显,总体疗效不理想。所以探索舌鳞癌耐药机理并加以有效逆转,已成为急待解决的问题。
非编码RNA(non-coding RNAs,ncRNAs)调控基因表达研究的兴起为为恶性肿瘤的研究提供了全新的思路,对此,我们分别研究了microRNA(miRNA)对腺样囊性癌侵袭转移的调控作用,以及长非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)对舌鳞癌化疗耐药的调控作用。
在第一部分研究中,我们采用低转移腺样囊性癌细胞株ACC2,SACC-83及相应的高肺转移细胞株ACCM,SACC-LM,探索了microRNA对腺样囊性癌转移的调控机制。microRNA微阵列结果显示,与ACC2细胞相比,miR-320a在ACCM细胞中表达显著下调。高表达miR-320a有效地抑制了ACCM和SACC-LM细胞的粘附、侵袭和迁移能力,而沉默miR-320a的表达可以增强ACC2和SACC-83细胞的侵袭迁移能力。荧光素酶报告实验证实ITGB3是miR-320a的靶基因。上调miR-320a表达可以抑制integrinβ3的蛋白水平,以及下游FAK、Src的磷酸化。在升高miR-320a表达的ACCM细胞中,共转染miR-320a靶向位点突变的ITGB3 cDNA可以重新恢复ACCM细胞的侵袭迁移能力。体内实验证实,高表达miR-320a显著抑制ACCM异植瘤的转移能力。miR-320a在发生转移的腺样囊性癌病人肿瘤样本中的表达水平显著低于未发生转移的肿瘤样本,miR-320a表达水平低病人预后差。本研究证实,miR-320a通过靶向ITGB3抑制腺样囊性癌转移,为研制针对腺样囊性癌转移特性的miRNA靶向药物提供了实验依据,同时miR-320a也可以作为预后因子,有望在临床上广泛应用。
在第二部分研究中,我们通过逐步增加顺铂浓度的方法建立了舌鳞癌细胞株CAL27和SCC9的稳定顺铂耐药株CAL27-res和SCC9-res,并探索IncRNA对舌鳞癌化疗敏感性的调控机制。IncRNA芯片结果显示,与亲本细胞CAL27相比,CAL27-res细胞中IncRNA表达普遍上调。qRT-PCR验证筛选出7个在CAL27-res和SCC9-res细胞中都显著上调的IncRNA。采用siRNA干预耐药细胞中IncRNA的表达水平,通过MTS细胞活性实验发现沉默长非编码RNA A013可以增强CAL27-res和SCC9-res细胞对顺铂的敏感性。以上结果为研究舌鳞癌化疗耐受提供了新思路。