原发性肝癌（以下简称肝癌）是最常见的恶性肿瘤之一，全球每年大约有37万新患病例。手术切除被认为是肝癌的首选治疗方法，然而常常因伴肝硬化、肿瘤多中心生长或肿瘤位置特殊（如贴近膈肌、大血管、胆管等），仅少数患者适宜根治性手术切除。据统计，肝癌的手术切除率仅10％～20％，手术后5年复发率高达85％～95％。因此，非手术方法在肝癌的综合治疗中起着重要作用。原发性肝癌手术机会少，术后复发率高，综合治疗在肝癌中具有非常重要的地位。化疗作为综合治疗的主要手段之一，对实体瘤有效率仍维持在20～50％，对实体瘤临床治愈的贡献仅为5％。而肝癌化疗效率低下的特点则相对其他实体瘤更加突出。而作为肿瘤治疗中效果确切的放疗手段在肝癌的治疗当中也存在很大局限性，例如当肝癌的肿块较大时，要求较高剂量使正常肝组织很难耐受，这时靠单一放疗技术很难达到根治效果，此外肝功能、膈肌运动、定位误差大等都成为影响放疗效果的不确定因素。 目前比较被广泛认可的局部化学消融疗法，因其经济而有效、操作简便，早已在国内外广泛开展，已是治疗肝癌的重要手段之一。临床上应用的有无水酒精注射、乙酸注射、盐酸注射及抗癌药、中草药、热盐水、鱼肝油酸钠、低浓度氢氧化钠注射等，而以经皮酒精注射（percutaneous ethanol injection，PEI）、经皮醋酸注射（percutaneous acetic acid injection，PAI）应用最广、最成熟。 经皮局部化学消融治疗（percutaneous local cllemo-ablation therapy，PLCAT）是指在超声、CT或MR等影像引导下，通过经皮穿刺的介导方法，将化学物质直接送至肿瘤病灶，致使病灶局部细胞发生凝固性坏死，进而达到治疗效果的方法。临床上常用的PEI和PAI，其原理主要是利用无水酒精、醋酸使细胞蛋白变性，进而引发癌组织凝固性坏死。然而，无水酒精注入瘤灶后的被动弥散，受肿瘤组织密度、血运情况、瘤内组织间隔等因素影响，往往弥散范围有限、弥散不均匀，导致消融不彻底、局部复发率高。醋酸可溶解脂质、胶原，比无水酒精更易在肿瘤结节中弥散。文献报道，50％醋酸的消融效果是无水酒精的3倍；然而，50％醋酸灭活肿瘤组织的同时容易对周围正常组织造成损害。 为了进一步提高局部化学消融疗法的治疗效果和减少治疗给患者带来的毒副作用，人们仍在不断探索新的消融剂，对甲苯磺酰胺（para-toluenesulfonamide，PTS）是近年来发现的一种新的化学制剂，具有较好的抗肿瘤作用，尤其适用于瘤体内局部注射；研究发现该药物选择性致肿瘤细胞坏死的同时，对正常细胞损伤轻微。本研究通过向荷瘤裸鼠瘤内注射PTS，并结合临床常用的治疗肿瘤手段——放疗/化疗，观察局部灭活作用及其与放化疗联合对疗效的影响，为PTS临床应用提供实验参考。 第一章、裸鼠皮下移植性CBRH-7919肝癌模型的建立。 目的： 为观察放疗及化疗结合对甲苯磺酰胺瘤内局部注射对裸鼠移植性CBRH-7919肝癌的治疗作用，构建裸鼠皮下种植性肝癌模型。 方法： 1．肿瘤细胞培养：选用CBRH-7919鼠肝癌细胞株，按常规方法培养。 2．传代裸鼠的制备：收集指数生长期的CBRH-7919肝癌细胞，加入PBS溶液搅匀，调整细胞浓度为107/L的细胞悬液，将其注入裸鼠背部皮下，每只注射0．1ml，注射后将裸鼠继续放置SPF级环境饲养。 3．裸鼠皮下移植性肿瘤模型的制作：当传代裸鼠背部皮下长出直径为0．8～1．0cm的肿瘤结节时，处死裸鼠，取出皮下肿瘤，剔除筋膜和坏死组织，选用新鲜鱼肉样部分放置无菌干燥培养皿中，加生理盐水2～3ml，用眼科剪将肿瘤组织剪成糊状，备用。用10％水合氯醛麻醉（5ml/kg，ip）裸鼠，皮肤常规消毒，使用1ml注射器抽取上述备用糊状肿瘤组织注入裸鼠背部皮下，每只注射0．1ml。裸鼠清醒后放置SPF级环境饲养饲养。待裸鼠背部皮下长出直径1．0cm左右大小肿瘤结节，表明裸鼠皮下移植性肿瘤模型构建成功。 结果： 1．所有传代裸鼠在肿瘤种植后4～6d，背部皮下均可见米粒大小的结节；肿瘤结节生长至直径为0．8～1．0cm的天数为8．36±1．04d。 2、80只建模裸鼠皮下种植肿瘤后10d，共68只裸鼠模型构建成功，成功率为85％，肿瘤结节长径≥1cm，平均直径为1．215±0．126cm；其它12只中，3只观察至种植后21d肿瘤最大直径不足0．5cm，9只未见肿瘤结节生长（包括8只出现明显腹水死亡）。 3、裸鼠皮下肿瘤肉眼观察呈类圆形、结节状，无完整包膜，剖面呈白色、鱼肉样；光学显微镜下观察：细胞染色深、大小和形态不一，核大深染、异形性明显，核分裂像多见，保持了原接种癌细胞的特点。 结论： 1．CBRH-7919鼠肝癌细胞株生物学特性更接近人肝癌细胞，肿瘤生长速度适宜，适合用于肝癌局部治疗方面的实验研究。 2．用裸鼠建立皮下种植性肿瘤模型，操作方便、成本低、成功率高。 第二章、对甲苯磺酰胺联合放/化疗治疗裸鼠CBRH-7919移植性肝癌的实验研究。 目的： 观察放疗及化疗结合对甲苯磺酰胺瘤内局部注射对裸鼠移植性CBRH-7919肝癌的治疗作用，为临床应用提供实验依据。 方法：取裸鼠皮下移植性CBRH-7919肝癌模型60只，将60只Balb/c（nu/nu）裸鼠随机分为6组，即PTS组、放疗组、放疗+PTS组、化疗组、化疗+PTS组和对照组，分别经皮瘤内注射PTS、局部肿瘤单纯放疗、瘤内注射PTS+局部肿瘤放疗、局部肿瘤经尾静脉注射丝裂霉素化疗、瘤内注射PTS+局部肿瘤经尾静脉注射丝裂霉素化疗、生理盐水，观察各组抑瘤率和生存期，进行统计分析。 结果： 1、治疗组生存时间较对照组延长有统计学意义，各治疗组裸鼠生存时间无统计学差别。 2、所有治疗组均明显抑制肿瘤生长，局部肿瘤注射PTS结合放疗/化疗抑制肿瘤生长优于单纯放/化疗或者单纯PTS注射，有统计学意义。 结论： 局部肿瘤注射PTS联合放疗/化疗治疗裸鼠移植性CBRH-7919肝癌，疗效优于单纯放/化疗或单纯PTS，安全、可靠。