研究目的：收集2011年和2012年重庆医科大学附属儿童医院的乙脑病例，采用双抗夹心ELISA法测定空白组、乙脑毒损脑络、毒陷心包组血中IL-10、TNF-α和IFN-γ的表达水平，观察其有无统计学差异,探讨（1）乙脑不同中医证型与IL-10、TNF-α和IFN-γ水平的关系；（2）IL-10、TNF-α和IFN-γ在乙脑的脑组织损伤过程中可能的作用机制；（3）探究乙脑不同阶段症状与细胞因子的关联性，揭示其本质与物质基础。为今后流行性乙型脑炎分型与治疗提供客观依据，为中医标准化进程提供新思路。采集2011和2012年重庆医科大学附属儿童医院流行性乙型脑炎患者（乙脑）的标本，收集乙脑毒损脑络、毒陷心包证临床资料，采集与检测理化指标、筛选中医证候易感基因相关的试验标本。采用Taqman法测定基因分型，统计不同组别间的多态性，旨在找到IL-10启动子区域中的位置-592和IFN-γ启动子区域中的位置-1616与乙脑患者疾病易感性、分型和预后的关联性。研究方法：全部84例患者均来源于2011年6月至2012年9月重庆医科大学附属儿童医院传染科住院部和门诊患儿。研究组包括毒损脑络组患者30例（男17，女13），平均年龄6.62±4.01岁；毒陷心包组患者30例（男18，女12），平均年龄5.16±2.79岁。对照组为同期于门诊体检的患者24例（男14，女10），平均年龄5.58±3.20岁。全部受检者于入院后或次日清晨空腹抽取肘静脉血4ml（用EDTA抗凝），在3000r/min的条件下离心后，分离出上层血清分装后置于-800C冰箱冷冻保存。用双抗体夹心ELISA法测定人外周血IL-10、TNF-α和IFN-γ的含量，人白介素10ELISA试剂盒、人肿瘤坏死因子αELISA试剂盒、人γ干扰素ELISA试剂盒由博士德提供。检测在武汉市第一医院生物实验室内按试剂说明完成。全部数据以±S表示，计数资料的比较采用卡方检验，计量资料的比较采t检验及方差分析。研究中的所有受试者（n：297）为2011年6月到2012年9月乙脑流行季节的知情同意的患者。其中，有66例为毒损脑络型患者（根据临床诊断及IgM抗体阳性诊断），39例为毒陷心包型患者（根据临床诊断及IgM抗体阳性诊断），乙脑患者均来自重庆医科大学附属儿童医院传染科住院部患儿，另外192例为空白组患者，均来自重庆医科大学附属儿童医院门诊体检儿童。全部受检者于入院后或次日清晨空腹抽取肘静脉血4ml（用EDTA抗凝）置于-80℃冰箱冷冻保存。使用康为世纪通用型柱式基因组提取试剂盒，在武汉市一医院生物实验室提取基因组DNA，用TaqMan探针荧光PCR方法测定基因分型，引物和荧光探针由金唯智公司设计合成。对测序结果进行统计分析，该数据用卡方检验（χ2）使用标准的统计软件,p<0.05有统计学意义。基因型频率采用Hardy-Weinberg平衡试验法统计。使用PLINK软件来计算基因型和等位基因频率的χ2值，比值比和95％置信区间的值。研究结果①毒损脑络、毒陷心包组各与空白组血清中IL-10水平对比，毒损脑络、毒陷心包组血清中IL-10含量均明显高于空白组，二者比较具有显著差异(P<0.05)。毒陷心包组血清中IL-10含量明显高于毒损脑络组，二者有显著差异。②毒损脑络、毒陷心包组与空白组血清中IFN-γ水平对比，毒损脑络、毒陷心包组血清中IFN-γ含量均明显高于空白组，二者比较具有显著差异(P<0.05)。毒陷心包组血清中IFN-γ含量明显高于毒损脑络组，二者有显著差异。③毒陷心包组的意识障碍严重程度明显高于毒损脑络组，二者有显著差异。④毒陷心包组的意识障碍持续时间明显高于毒损脑络组，二者有显著差异。⑤将60例患者意识障碍程度与其周围血中IL-10水平进行Pearson等级相关检验，两者的相关系数为0.276，P=0.032<0.05具有显著相关。⑥将60例患者的意识障碍程度与其周围血中IFN-γ水平进行Pearson等级相关检验，两者的相关系数为0.424，P=0.001<0.01具有显著相关。⑦IFN-γ启动子区域-1616位点TT纯合子频率与TC加CC的频率的比较在乙脑组（即所有乙脑患者，包括毒损脑络组与毒陷心包组）和空白对照组间频率分布有统计学意义（TT vs TC+CC:Χ2=4.79，P=0.0287**＜0.05）。⑧IL-10启动子区域-592位点CC纯合子频率与CA加AA的频率在乙脑组（即所有乙脑患者，包括毒损脑络组与毒陷心包组）和空白对照组比较时频率分布有统计学意义（CC vs CA+AA:Χ2=3.93，P=0.0475**）,另外，等位基因频率C比A的频率在乙脑组（即所有乙脑患者，包括毒损脑络组与毒陷心包组）和空白对照组间比较，频率分布有统计学意义（C vs A:Χ2=5.344，P=0.021**＜0.05，OR=0.638，95％CI=0.44-0.94）。⑨等位基因频率C比A的频率在毒损脑络组和空白对照组间频率分布有统计学意义（C vs A:Χ2=4.045，P=0.044**＜0.05，OR=0.634，95％CI=0.41-0.99）。研究结论1. IL-10、IFN-γ水平在毒损脑络型和毒陷心包证型比较时，含量有统计学意义，提示IL-10、IFN-γ可作为临床分型的依据，为中医卫气营血传变提供依据，并可作为感染程度、脑损伤指标之一运用于临床。2.IL-10具有抑制炎症因子，防治细胞过度损伤的功能，因此IL-10水平可间接反映炎症的严重程度，本实验反映了IL-10水平与意识障碍程度有显著相关性，提示IL-10能反映脑组织损伤程度和炎症的严重程度，故可作为临床辨证分型的依据。3．本实验反映了IFN-γ水平与意识障碍程度有显著相关性，提示IFN-γ能反映出脑组织损伤程度，亦能提示邪入营血,内扰心神，因此可以作为临床辨证分型、判断疾病轻重的依据。4. IFN-γ的-1616位点纯合子TT基因型更不容易患流行性乙型脑炎；5.IL-10的-592A等位基因的受试者更容易患流行性乙型脑炎，纯合子CC基因型更不容易患乙脑。在个性化医疗的时代，了解基因突变和传染病的易感性之间的联系是很有必要的，这些信息有助于医生了解病人疾病可能的预后，可提前采取适当的治疗措施。