近年来,以免疫检查点PD-1/PD-L1为靶点的免疫治疗在晚期非小细胞肺癌（non-small cell lung carcinoma,NSCLC）治疗的临床应用中取得了突破性进展,目前已被FDA批准用于晚期肺癌的一线治疗。然而,晚期NSCLC患者中仅有20%左右对PD-1/PD-L1抑制剂产生有效应答,导致这种现象的主要原因是肿瘤免疫抑制性微环境的形成。因此,探索促进肿瘤免疫抑制性微环境形成的新因素和机制,有助于更好地提升机体免疫识别和杀伤的能力。地高辛（digoxin）和血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,AngⅡ）在心血管系统中均扮演重要的角色。Digoxin是强心苷类药物,具有增强心肌收缩力和抑制Na+/K+-ATPase等多种生物学功能。AngⅡ是肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）的主要活性物质,具有调节水盐代谢平衡及血压等重要生理学功能。Digoxin和AngⅡ在心血管系统疾病中的作用已被广泛研究,但在肿瘤免疫中的作用报道较少。因此,研究digoxin和AngⅡ在肿瘤免疫中的作用,对发现digoxin和AngⅡ的新生物学功能及扩大免疫治疗的受益群体具有重要的临床意义。本研究建立荷LLC肺腺癌小鼠模型,分别连续腹腔注射digoxin或AngⅡ 13天和15天,发现digoxin和AngⅡ能够明显促进LLC肺腺癌荷瘤小鼠体内肿瘤生长,肿瘤重量增加。有趣的是,digoxin和AngⅡ均可降低瘤内CD4+T和CD8+T淋巴细胞的浸润,增加肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophages,TAMs）细胞的积累,其中AngⅡ还可增加免疫抑制性粒细胞的聚集。此外,digoxin和AngⅡ均能上调肿瘤免疫抑制性微环境相关基因mRNA水平。以上结果表明,digoxin和AngⅡ可促进NSCLC免疫抑制性微环境的形成。程序性死亡配体1（programmed cell death-ligand 1,PD-L1）在肿瘤微环境中呈现高表达,是肿瘤发生免疫逃逸的主要分子机制之一。前文已证明digoxin和AngⅡ可以促进NSCLC中免疫抑制性微环境的形成,那么该过程中是否有PD-L1的参与是值得研究的。本研究发现,digoxin和AngⅡ不仅在体内可诱导小鼠肺腺癌肿瘤组织中PD-L1蛋白表达的上调,还可在体外增加NSCLC细胞（LLC、H1975和人肺腺癌原代细胞LAC275）内PD-L1的表达。以上结果提示,PD-L1可能参与digoxin和AngⅡ促进NSCLC免疫抑制性微环境的形成。为了深入研究digoxin和AngⅡ诱导PD-L1表达的分子机制,分别利用mRNA半衰期和荧光素酶报告基因等实验手段,证明digoxin和AngⅡ可延长PD-L1 mRNA的半衰期及增强PD-L1 3’-非翻译区（3’-untranslated region,3’-UTR）报告基因的活性。该结果提示,digoxin和AngⅡ诱导PD-L1 mRNA表达可能发生在转录后水平,且该过程可能与mRNA的稳定性有关。由于AU-富集元件（AU-rich element,ARE）与对应的RNA结合蛋白相互作用,可调节mRNA的稳定性,从而实现在转录后水平上对基因表达量的控制。本研究结果发现,RNA结合蛋白人类抗原 R（human antigen R,HuR）与 PD-L1 3’-UTR 中 ARE 序列 AUUUA结合,且digoxin和AngⅡ可上调HuR的表达。以上结果提示,digoxin和AngⅡ诱导PD-L1 mRNA表达,可能与促进HuR和PD-L1 3’-UTR中ARE结合从而增加PD-L1 mRNA稳定性有关。全文总结:digoxin和AngⅡ通过诱导PD-L1的表达促进NSCLC免疫抑制性微环境的形成,其分子机制可能是由于增强HuR和PD-L1 3’-UTR结合,进而介导PD-L1 mRNA稳定性导致的。本研究的创新点是:（1）明确了 digoxin和AngⅡ能够促进肿瘤免疫抑制性微环境的形成。（2）Digoxin和AngⅡ通过ARE调控PD-L1 mRNA表达。（3）HuR正性调节PD-L1 mRNA表达。本研究证实digoxin和AngⅡ在NSCLC肿瘤免疫逃逸中的作用,这对于发现digoxin和AngⅡ的新生物学功能及扩大免疫治疗的受益群体具有重要的临床意义。