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第一部分骨关节炎动物模型的建立目的:比较关节腔内注射1.6%木瓜蛋白酶、关节腔内注射胶原蛋白酶、关节固定法、股静脉结扎法等四种方法,筛选出适合快速、大规模造模的方法。1.木瓜蛋白酶关节腔内注射法OA造模试验1.1材料与方法健康新西兰白兔8只,雌雄各半,6~8个月龄,体重2.0~2.5kg。分别于实验的第1、4日于右膝关节腔内注射1.6%papain溶液0.3ml制备OA动物模型。造模后4周后对模型行软骨取材及病理学观察。1.2结果一般情况:第一次注射1.6%木瓜蛋白酶溶液后,右膝关节出现不同程度的肿胀,第二次注射后动物出现跛行,触摸右膝关节时出现挣扎和弹腿。2天后跛行消失,10天左右肿胀消退。所有动物的进食饮水二便未受明显影响,全部动物存活,未出现明显异常生物行为。肉眼和手术显微镜下观察:8只实验兔之胫骨内侧平台软骨均呈灰黄色或灰白色,无光泽,表面可见裂纹,个别可见小而浅的局部糜烂,未见明显骨赘形成。关节软骨光镜下观察:软骨表面粗糙不规则,可见较小和浅的裂隙,软骨细胞数量减少,排列紊乱,无细胞簇聚现象。PAS和甲苯胺蓝染色示基质轻度失染。1.3结论木瓜蛋白酶关节腔内注射法模型的病理变化与临床OA极为相似,造模过程简单,成功率高,适合快速大批量建立OA模型作软骨病理、药物防治的研究。2.胶原蛋白酶OA模型试验2.1材料与方法采用6只健康的普通级新西兰白兔,雌雄不限,6~8个月龄,体重2.0~2.5kg,分别于第1、4天向实验兔的右侧膝关节腔内注射Ⅱ型胶原酶溶液0.5ml(即2mgⅡ型胶原酶)制备OA模型。造模后4周后对模型行软骨取材及病理学观察。2.2结果造模实验兔右膝关节腔内注射Ⅱ型胶原蛋白酶溶液后,精神较差,自发活动明显减少,右膝关节出现不同程度的肿胀,行走时右下肢不着地,呈明显跛行;触摸右膝关节时出现挣扎和弹腿。2周后跛行基本消失。右膝关节DR成像显示膝关节关节间隙对称,未见明显狭窄,骨性关节面光滑、锐利,未见骨赘形成。髌下脂肪垫清晰。关节周围软组织未见肿胀。右膝关节MRI均显示股骨髁及胫骨平台关节软骨表面光整,信号均匀,无明显变薄及缺损,髌上囊可见少量积液,软骨下骨信号未见异常。大体标本:股骨髁表面尚光整,色泽略显暗淡,胫骨平台表面欠光滑,凹凸不平,呈粗颗粒状改变,未见明显骨赘形成。HE染色:软骨表层可见不规则裂隙,辐射层及钙化层结构完整,软骨细胞排列规则,数量略减少,潮线完整。2.3Ⅱ型胶原蛋白酶关节腔内注射法制作的兔膝关节OA模型,模型成型时间最短(4周),在病理学改变上与人类OA基本一致,为一种较为理想的早期OA动物模型。该方法操作技术简单,周期较短,非常适合快速大批量建立骨关节炎模型。3.石膏关节固定法和股静脉结扎法预实验结果显示石膏固定法制备OA模型具有死亡率相对较高,制备过程需严密观察且时刻需要调整石膏固定,过程中动物固定时间不一致,导致制备的OA模型病变程度不一致等缺点;而采用股静脉结扎的方法制备OA模型,由于术中出血及术后感染,也具有一定的死亡率,并且单纯行股静脉结扎难以成功复制典型的动物OA模型。因此上述两种造模方法不适合本研究的较大规模造模。4.结论本课题参考文献报道的造模方法,试验性地复制接近临床OA病理改变的新西兰兔OA模型。证实了关节腔内注射化学物质诱导法更为适合本试验的现状,可在短时间内,大量并成功复制OA模型,木瓜蛋白酶和胶原蛋白酶两者比较,以后者所复制的模型病理改变更接近人类骨关节炎模型。而关节固定法和手术造模由于对实验环境和实验动物的护理有较高的要求,实验动物模型发生并发症的机会较高,并发症的预防和治疗都较困难。造成实验动物死亡时有发生。因此不适合在现有条件下大量复制OA模型。第二部分木瓜蛋白酶OA模型关节腔内注射医用臭氧的实验研究1.目的通过研究医用臭氧关节腔内直接注射对OA模型关节软骨的影响,探讨关节腔内直接注射医用臭氧治疗骨关节炎的可行性,同时探讨医用臭氧治疗骨关节炎的可能机制。本实验OA模型以关节腔内注射木瓜蛋白酶法制备。选择研究氧化应激反应常用的指标NO(Nitric oxide,一氧化氮)和SOD(Superoxide dismutase,超氧化物歧化酶)作为观察氧化应激反应的指标。2.材料与方法2.1.动物分组及模型建立32只兔随机分为正常组(简称Normal组)、OA模型组(简称model组)、臭氧关节腔内注射组(O3 Intra-articular cavity Injection,简称O3IACI)2组:低剂量(20μg/ml)臭氧注射组(简称O3IACI-20)和高剂量(40μg/ml)臭氧注射组(简称O3IACI-40)等4组,每组8只。normal组不做任何处理,正常喂养。其余3组共24只兔,分别于实验的第1、4日于右膝关节腔内注射1.6%papain溶液0.3ml制备OA动物模型。2.2动物处理动物OA模型制作完成一周后,O3IACI-20组和O3IACI-40组采用右膝关节腔内注射的方法给药。O3IACI-20组右膝关节内注射浓度为20ug/ml的医用臭氧2ml,每周两次,共四周;O3IACI-40组右膝关节内注射浓度为40ug/ml的医用臭氧2ml,每周两次,共四周。Normal组和model组正常喂养,不作任何处理。末次注射后1周抽取关节液和血液并处死各组动物行软骨组织取材。2.3指标检测血清NO和SOD活性检测;关节液NO和SOD活性检测2.4软骨组织病理学检查软骨石蜡标本切片分别行HE染色、过碘酸雪夫氏(PAS)染色及甲苯胺蓝(Toluidine Blue)染色,光镜下观察病理变化,以Mankin’s评分标准进行评分。2.5统计学处理所有资料均以均数±标准差表示,采用Levene法对多样本方差齐性进行检验,方差齐使用完全随机设计的单因素方差分析(one-way ANOVA),方差不齐则采用Welch检验或秩和检验,多样本均数间的比较采用LSO-t及Games-Howell等检验方法。以SPSS11.5统计分析软件进行统计分析,P<0.05有统计学意义。3.结果3.1动物行为观察第一次注射木瓜蛋白酶当天,所有建模实验兔右膝关节出现不同程度的肿胀,第二次注射木瓜蛋白酶后当天出现跛行,触摸右膝关节时出现挣扎和弹腿。2天后跛行消失,10天左右肿胀消退。O3IACI-20组、O3IACI-40组注射臭氧后动物行动无明显改变,个别实验兔行为稍活跃。3.2组织形态学观察3.2.1膝关节软骨肉眼及手术显微镜下观察观察部位:胫骨内侧平台软骨。结果显示:normal组:关节软骨呈蓝白色,有光泽,表面光滑,无纤维化,无裂纹及溃疡形成。Model组:软骨呈灰黄色或灰白色,无光泽,表面可见裂纹,个别可见小而浅的局部糜烂,未见明显骨赘形成。O3IACI-20组:软骨呈灰黄色,表面粗糙,无光泽,裂纹多见,表面糜烂较明显和多见,未见明显骨赘。O3IACI-40组:软骨表面粗糙,裂纹及糜烂情况较低剂量组更明显和多见。未见明显骨赘。3.2.2膝关节软骨光镜下观察normal组:软骨表面光滑、平整,软骨切线层、移行层、深层和钙化层层次清楚,潮线完整,软骨细胞分布均匀,细胞排列整齐,无簇聚软骨细胞;PAS染色软骨基质着色为均匀的红色,无失染现象;甲苯胺蓝染色示基质呈均匀的深蓝色,无失染现象。model组:软骨表面粗糙不规则,可见较小和浅的裂隙,软骨细胞数量减少,排列紊乱,无细胞簇聚现象。PAS和甲苯胺蓝染色示基质轻度失染。O3IACI-20组:软骨表面缺损,出现空陷窝,软骨细胞部分消失,软骨变薄,可见明显的裂隙,潮线模糊或多层次,PAS和甲苯胺蓝染色示基质染色失染较model组明显。O3IACI-40组:软骨表面缺损,软骨变薄,细胞减少,排列紊乱,可见明显成簇样细胞增生,层次不能区分,裂隙较低剂量组更多和更明显,PAS和甲苯胺蓝染色示基质失染情况较低剂量组更加明显。3.2.3关节软骨Mankin’s评分正常关节软骨Mankin’s评分为0.0±0.0,model组评分为4.5±0.5高于normal组(P<0.01),O3IACI组评分为6.0±0.8~8.1±1.2高于model组(P<0.01);其中O3IACI-40组评分(8.1±1.2)又高于O3IACI-20组的评分(6.0±0.8)(P<0.01),表明多次重复关节腔内注射臭氧对骨关节炎的关节软骨有损伤作用,且损伤程度随臭氧浓度的增加而加重。3.3生化指标的检测血清NO水平检测:与normal组血清NO水平(91.88±26.94μmol/L)比较,model组(146.75±16.43μmol/L)和O3IACI组(156.01±24.53μmol/L、166.23±22.01μmol/L)血清NO水平均高于normal组,差异有显著性(P<0.01);O3IACI组和model组血清中NO水平比较差异无显著性(P>0.05),O3IACI-20组(156.01±24.53μmol/L)和O3IACI-40组(166.23±22.01μmol/L)组间血清中NO水平比较亦无显著性差异(P>0.05)。血清SOD浓度检测:与normal组血清SOD水平(246.18±34.65 U/ml)比较,model组血清SOD(330.78±46.68 U/ml)和O3IACI组血清中SOD水平(374.96±44.02 U/ml、411.59±30.00 U/ml)均高于normal组,差异有显著性(P<0.01),O3IACI组血清中SOD水平高于model组,差异有显著性(P<0.05),O3IACI-20组血清SOD水平(374.96±44.02 U/ml)与O3IACI-40组血清SOD水平(411.59±30.00 U/ml)比较,差异无显著性(P>0.05)。关节液NO水平检测:model组关节液NO水平(111.37±35.92μmol/L)和O3IACI组关节液中NO水平(108.28±20.45μmol/L、105.16±38.18μmol/L)均高于normal组(31.43±5.06μmol/L),差异有显著性(P<0.01);O3IACI组与model组各组间及O3IACI I-20组(108.28±20.45μmol/L)和O3IACI-40组(105.16±38.18μmol/L)组间关节液中NO水平差异无显著性(P>0.05)。关节液SOD浓度检测:model组关节液中SOD水平(86.02±48.47 U/ml)与normal组关节液SOD水平(63.51±39.81 U/ml)比较,差异无显著性(P>0.05),O3IACI组关节液中SOD水平(119.05±34.96 U/ml、140.14±42.76 U/ml)与normal组关节液SOD比较,差异有显著性(P<0.05);O3IACI-40组关节液中SOD水平(140.14±42.76 U/ml)与model组关节液SOD水平比较,差异有显著性(P<0.05);而O3IACI-20组关节液中SOD水平(119.05±34.96 U/ml)与model组关节液SOD比较,差异无显著性(P>0.05);两O3IACI组组间关节液中SOD水平比较差异无显著性(P>0.05)。4.结论臭氧关节腔内注射可以引起SOD的过度分泌,但对NO没有影响,提示臭氧治疗骨关节炎的可能机制之一是通过上调抗氧化酶的过度表达阻断慢性氧化应激反应在骨关节炎发病和发展中的作用。骨关节炎模型多次直接腔内注射臭氧,对病变软骨有进一步损害的作用,损害程度随臭氧浓度增加而加重。臭氧直接关节腔内注射的安全性值得深入研究。在骨关节腔内注射臭氧治疗骨关节炎的机理未确认之前,需慎用该治疗入路。第三部分:胶原蛋白酶OA模型臭氧关节腔内注射与经静脉臭氧化自体血回输的对照实验研究1.目的用两种不同方法把臭氧引人实验动物体内,观察相关血清细胞因子在臭氧引人前和后的变化,进一步探讨臭氧治疗OA的生物学机理,进一步明确臭氧对OA模型关节软骨的病理影响。2.材料与方法2.1.动物分组及模型建立采用36只健康的普通级新西兰白兔,雌雄不限,6~8个月龄,体重2.0~2.5kg。36只兔随机分为正常对照组(简称Normal组);模型对照组(简称model组);臭氧关节腔内注射组(O3 Intra-articular cavity Injection,简称O3IACI)2组:10μg/ml臭氧关节腔内注射组(简称O3IACI-10组)、30μg/ml臭氧关节腔内注射组(简称O3IACI-30组);臭氧自血回输组(O3 AutoHemoTherapy,简称O3AHT)2组:10μg/ml臭氧自血回输组(简称O3AHT-10组)和30μg/ml臭氧自血回输组(简称O3AHT-30组),每组6只。正常组不做任何处理,正常喂养。其余30只兔,分别于实验的第1、4日于右膝关节腔内注射Π型胶原蛋白酶溶液0.5ml制备骨关节炎动物模型。2.2动物处理动物OA模型制作完成4周后,O3IACI-10组和O3IACI-30组采用右膝关节腔内注射的方法给药。O3IACI-10组右膝关节内注射浓度为10ug/ml的医用臭氧2ml,每周两次,共四周;O3IACI-30组右膝关节内注射浓度为30ug/ml的医用臭氧2ml,每周两次,共四周。O3AHT-10组和O3AHT-30组均采用自体静脉血回输的方法给药(大自血回输),经兔耳缘静脉采取4ml静脉血后,分别抽取浓度为10μg/ml及30μg/ml的臭氧气体4ml,第一管弃之,第二管经三通管与静脉血充分溶解、混匀后经兔耳缘静脉回输入血。每周进行两次,共四周。末次注射后4周行影像学观察,抽取血液样本,处死各组动物行病理学检查。2.3观察指标2.3.1一般行为观察2.3.2影像学观察(DR及MRI)2.3.3血清生化指标及细胞因子的检测血清NO和T-SOD活性检测、血清TNF-α和IL-1β含量的检测2.3.4病理组织学观察软骨石蜡标本切片分别行HE染色、过碘酸雪夫氏(PAS)染色及甲苯胺蓝(Toluidine Blue)染色,光镜下观察病理变化,并作Mankin评分2.3.5统计学处理所有资料均以均数士标准差表示,采用Levene法对多样本方差齐性进行检验,方差齐使用完全随机设计的单因素方差分析(one-way ANOVA),方差不齐则采用Welch检验,多样本均数间的比较采用LSD-t及Games-Howell等检验方法。以SPSS11.5软件进行统计分析,P<0.05有统计学意义。3.结果3.1一般情况观察第一次注射胶原蛋白酶后当天,所有建模动物右膝关节出现不同程度肿胀、可见明显跛行,触摸右膝关节时略有挣扎、弹腿,活动量减少。距离第二次胶原蛋白酶注射完毕后6~7周,50%的实验动物可于关节内侧扪及骨赘,关节活动稍受限;灵活性变差。O3IACI-10组、O3IACI-30组、O3AHT-10组及O3AHT-30组的实验兔接受臭氧关节腔内注射或自血回输后,较Model组活跃,精神状态较好,活动增多,步态恢复较Model组迅速。3.2影像学观察:3.2.1 DR成像Normal组:双膝关节关节间隙对称,未见明显狭窄,骨性关节面光滑、锐利,未见骨赘形成。髌下脂肪垫清晰。关节周围软组织未见肿胀。Model组:右膝关节内侧胫骨平台明显骨质增生、变尖,骨赘形成,内侧关节囊肿胀,髌下脂肪垫透亮度减低,关节间隙狭窄。O3IACI-10组、O3IACI-30组、O3AHT-10、O3AHT-30组所见DR改变与Model组大致相同,其中O3IACI-10组、O3IACI-30组关节间隙无明显狭窄。3.2.2膝关节MRI成像Normal组:右膝股骨髁及胫骨平台关节软骨表面光整,信号均匀,无明显变薄及缺损,软骨下骨信号未见异常,关节腔内未见积液。model组:右膝内侧胫骨平台关节软骨明显变薄,信号强度减低,内侧股骨髁关节软骨厚度、信号尚可,软骨下骨信号未见明确异常;髌上囊少量积液。O3IACI-10组、O3IACI-30组、O3AHT-10、O3AHT-30组所见MRI改变同model组大致相仿。3.3血清生化指标及细胞因子3.3.1血清NO含量及T-SOD活性采用硝酸还原酶法,根据样品的吸光度,测定各组样本的NO含量及T-SOD活性。各组血清NO含量(单位:μmol/L)分别为:normal组79.44±15.31;Model组152.23±17.88:O3IACI-10组163.20±22.31;O3IACI-30组158.05±36.47;O3AHT-10组183.21±23.12;O3AHT-30组183.95±50.72。各组血清T-SOD活性(单位:U/ml)分别为:normal组233.84±30.66;Model组359.71±66.73;O3IACI-10组351.23±46.46;O3IACI-30组375.85±75.96;O3AHT-10组397.01±65.81;O3AHT-30组379.05±37.67。经过检验,各治疗组和模型组的血清NO含量和T-SOD活力均高于正常组(均为P<0.05);各治疗组问及治疗组与模型组间的血清NO含量和T-SOD活力无显著性差异(均为P>0.05)。3.3.2血清TNF-α和IL-1β含量采用双抗夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中TNF-α和IL-1β的含量。各组血清TNF-α浓度(单位:pg/mL)分别为:normal组8.50±3.46;Model组28.37±17.40;O3IACI-10组88.72±72.88;O3IACI-30组198.98±310.97;O3AHT-10组56.07±73.83;O3AHT-30组39.12±40.74。各组血清IL-1β浓度(单位:pg/ml)分别为:normal组43.37±18.27;Model组146.89±98.93;O3IACI-10组416.30±319.45;O3IACI-30组691.71±798.24;O3AHT-10组287.24±363.95;O3AHT-30组219.72±229.94。经过检验,各治疗组和模型组的血清IL-1β含量高于正常组(均为P<0.05);各治疗组之间及治疗组与模型组间的血清IL-1β含量无显著性差异(均为P>0.05)。3.4病理学观察3.4.1大体观察Normal组:双侧关节腔内无积液,滑膜无增生、肥厚,双侧股骨髁及胫骨平台表面光滑,色泽鲜亮,未见软骨缺损及骨赘形成。Model组:右膝关节腔内可见积液,呈粘稠的淡黄色,滑膜明显增生、肥厚,右股骨髁表面尚光整,右胫骨平台色泽灰暗,表面见粗颗粒状改变,内侧关节软骨糜烂、变薄。右胫骨平台内侧缘可见骨赘形成。O3IACI-10组、O3IACI-30组、O3AHT-10、O3AHT-30组所见与model组大致相仿,没有明显差别。3.4.2光镜观察3.4.2.1关节软骨Normal组:关节软骨表面光滑、平整,软骨切线层、移行层、放射层和钙化层层次清楚,潮线完整,软骨细胞分布均匀,细胞排列整齐,无簇聚或减少;甲苯胺蓝染色示基质呈均匀的深蓝色,无失染现象。Model组:关节软骨表层变薄、粗糙,部分区域呈绒毛状,可见较多裂隙从表层软骨延伸向下深达钙化层,潮线不完整,软骨层自软骨下骨剥离;软骨细胞变性,数量减少;甲苯胺蓝染色示基质失染,软骨纤维化。O3LACI-10组、O3IACI-30组、O3AHT-10、O3AHT-30组均出现model组改变,并显示软骨裂隙,裂隙以O3IACI-30组、O3AHT-30组更多和更深,其中O3IACI-10组、O3IACI-30组可见软骨细胞成簇样增生。3.4.2.2滑膜:Normal组:滑膜组织无肥厚及增生,无血管侵入,无炎细胞浸润。Model组:滑膜组织毛细血管充血,血管周围可见炎性细胞浸润。O3IACI-10组、O3IACI-30组、O3AHT-10、O3AHT-30组出现了model组的所有改变,并有增生现象。3.4.3关节软骨Mankin’s评分各组Mankin’s评分:normal组0.0±0.0,Model组10.2±1.9;O3IACI-10组8.8±1.5;O3IACI-30组9.3±2.1;O3AHT-10组8.2±1.9;O3AHT-30组8.6±2.7。模型组、各治疗组评分高于正常组(P<0.05),各治疗组间及与模型组间无显著性差异(P>0.05),表明治疗组关节软骨的损害程度与模型组无差异,臭氧治疗不能改善缓骨关节炎的病理进程。4.结论经关节腔内臭氧注射及经静脉臭氧化自体血回输均可引起T-SOD的过渡分泌,提示臭氧可上调抗氧化酶的过渡表达。但对OA模型升高的血清NO没有抑制作用。两种给药途径对OA模型升高的血清IL-1β和TNF-α没有明确的抑制作用。经静脉两种浓度的臭氧化自体血回输对OA模型软骨病理改变无逆转作用;经关节腔内两种浓度臭氧直接注入对OA模型软骨病理改变无逆转作用,30μg/ml浓度臭氧关节腔内直接注射后OA模型软骨病变发生损害加重。第四部分:OA模型关节软骨及臭氧对其作用的MRI评价1.目的探讨理想的关节成像序列及成像参数用于关节软骨的定量分析,并评价医用臭氧对OA模型关节软骨的作用。2.材料与方法2.1动物分组和模型的制备、动物处理详见论文第三部分。2.2磁共振成像成像时间:末次注射臭氧后4周。实验兔麻醉满意后固定于自制的检查板,扫描使用Philip Intera 1.5T磁共振扫描仪,采用C3表面线圈,行双膝的矢状面扫描。2.3实验兔膝关节磁共振成像序列对比实验2.3.1各序列扫描参数设定对normal组内6只正常实验兔进行右膝关节MRI,成像序列包括施加脂肪抑制的质子加权成像PDW/SPAIR/D,无脂肪抑制的T2加权三维快速梯度回波序列(T2W3DFFE),水激励的三维快速扰相梯度回波序列3DWATSc2.3.2不同脉冲序列关节软骨信噪比(signal to noise ration,SNR)及软骨与骨髓对比信噪比(contrast to noise ration,CNR)的测定和比较方法:MR扫描后测量图像中关节软骨、软骨下骨在上述3种脉冲序列中的信号强度。然后计算出关节软骨信噪比(SNR)和关节软骨与软骨下骨的对比噪声比(CNR)。2.3.3关节软骨厚度及信号强度的测量方法:将Dicom数据分别导入Orisix 3.02(School of Medicine of the GenevaUniversity,Switzerland)及eflim workstation 2.1.2(Merge healthcare,USA)中,计算出某实验兔关节软骨厚度及信号强度的平均值。2.4关节软骨的MRI与病理学对比观察对Normal组、model组、O3IACI-10组、O3IACI-30组、O3AHT-10组、O3AHT-30组6组实验兔的关节软骨MR成像与病理学改变作对照分析。2.5统计学处理:所有资料均以均数±标准差表示,采用Levene法对多样本方差齐性进行检验,方差齐使用完全随机设计的单因素方差分析(one-way ANOVA),多样本均数间的比较采用LSD-t检验,方差不齐则采用秩和检验;对所得的关节软骨平均厚度及信号强度与第三部分测得的Mankin’s评分行直线相关分析,若变量间存在相关则进一步做多元线性回归,明确Mankin’s评分与关节软骨的厚度或信号强度有无线性关系。以SPSS 11.5统计分析软件进行统计分析,P<0.05有统计学意义。3.结果3.1.1 normal组正常兔膝关节软骨不同脉冲序列的信号特点PDW/SPAIR/D序列:关节软骨表现为覆盖于软骨下骨的均匀中高信号带;T2W 3D FFE序列:关节软骨则呈单层中等信号带,与骨髓隔以薄层低信号区;3D WATSc序列:关节软骨表现为均一、光整的高信号带,与低信号的软骨下骨分界清晰。3.1.2 Normal组正常兔膝关节软骨不同脉冲序列的SNR及CNRPDW/SPAIR/D、T2W3DFFE及3DWATSc组间SNR无显著性差异(p>0.05):3DWATSc组CNR高于PDW/SPAIR/D组及T2W3DFFE组(p<0.05),而PDW/SPAIR/D组和T2W3DFFE组的CNR无显著性差异(p>0.05)。3.1.3各实验组关节软骨的平均厚度及信号强度对比与Normal组比较,model组、各臭氧干预组的实验兔膝关节软骨平均厚度及信号强度明显变薄和降低,(p<0.05),但Model组、O3IACI-10组、O3IACI-30组、O3AHT-10组及O3AHT-30组各组间的关节软骨平均厚度及信号强度均无显著性差异(p>0.05)。3.2关节软骨的MRI与病理学对比观察:Normal组:MRI显示右膝股骨髁及胫骨平台关节软骨表面光整,信号均匀,无变薄及缺损;大体标本及光镜下可见正常软骨表现。Model组:MRI显示右膝内侧胫骨平台关节软骨明显变薄,信号强度减低:同一部位肉眼观察见软骨色泽灰暗,表面见粗颗粒状改变,内侧关节软骨糜烂、变薄:光镜下关节软骨变薄、粗糙,表层呈绒毛状,可见较多裂隙从表层软骨延伸向下深达钙化层。O3IACI-10组、O3IACI-30组、O3AHT-10组、O3AHT-30组各组MRI改变与model组相仿,显示右膝股骨内侧髁及内侧胫骨平台关节软骨不同程度变薄,信号减低。同一部位标本肉眼及光镜下出现了model所见的改变,并显示软骨裂隙,裂隙以O3IACI-30组、O3AHT-30组更多和更深,其中O3IACI-10组、O3IACI-30组可见软骨细胞成簇样增生。3.3关节软骨平均厚度及信号强度与Mankin Score的直线相关及回归分析对关节软骨平均厚度及信号强度与组织学Mankin Score行Pearson相关分析,结果关节软骨平均厚度与信号强度呈显著的正相关;关节软骨平均厚度与Mankin Score呈显著的负相关;关节软骨平均信号强度与Mankin Score呈显著的负相关。以Mankin Score为应变量,关节软骨平均厚度及信号强度为自变量,采用逐步选择法作多元线性回归分析。结果仅关节软骨平均厚度选入方程,信号强度被剔除,回归方程为Y=18.582-0.023X(Y为Mankin Score,X为关节软骨平均厚度),R2=0.528,Mankin Score与关节软骨的平均厚度存在线性回归关系。4结论三维扰相梯度回波结合水激励技术成像时间短,是观察OA模型关节软骨的比较理想的成像序列,由于小动物的关节软骨较薄,在不造成信噪比显著降低的同时,需适当提高空间分辩率,利于关节软骨的观察。通过测量膝关节MRI的软骨厚度及信号强度,可以对关节软骨进行量化指标评价,其中软骨厚度测量优于信号强度测量。经对各组实验兔软骨厚度和信号强度的对照研究,医用臭氧关节腔内注射及自血疗法对OA的关节软骨均无修复作用,与病理结果一致。