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众所周知，骨缺损及骨不连一直是骨科临床治疗的难题，随着科学技术的发展，研究人员及临床医师试图寻找新的治疗方案以代替创伤大，并发症多的自体骨移植。因此骨缺损修复对移植骨要求的增长已成为骨组织工程的一个重要推动力。完整的骨再生过程需要三个关键要素，即信号因子(生长因子)，靶细胞(功能细胞)和支架材料(载体)。而信号因子骨形态发生蛋白—7(bone morphogeneticprotein-7，BMP-7)因为其显著有效的体内外诱骨作用成为研究的热点。 BMP-7是1990年英国和美国的科学家从基因组文库中调出的序列，分别被命名为BMP-7和OP-1。该蛋白为β-转化生长因子(transforming growth factor-β，TGF-β)超家族成员，是一个同源双链的酸性糖蛋白，大量研究表明BMP-7可跨种属诱导成骨而且新骨生成迅速，其生成量与BMP-7植入量呈正相关。 虽然BMP-7具有细胞因子量微效著的特点，但在实际应用中局部所需的BMP-7仍需达到毫克级，而且BMP-7进入体内后易随体液流失降解，半衰期短，不能局限在骨缺损部位较长时间发挥作用，因此单纯在骨缺损局部应用BMP-7是不可行的，必须寻找更有效的办法保证BMP-7活性的充分发挥，基因治疗是可选择的方法之一。而基因治疗成败的关键在于目的基因的高效转移并适度表达，本课题所应用的腺病毒载体是近年来广泛应用的病毒载体之一，它具有感染宿主细胞范围广，不整合到宿主基因组中，表达持续的时间短等特点，这都是局部成骨所需要的。 任何细胞因子作用的发挥都离不开靶细胞，研究证明BMP-7可作用于多种靶细胞：成骨细胞、破骨细胞、软骨细胞及骨髓基质干细胞(marrow stromal cells，MSCs)，而只有MSCs是具有分化潜能的干细胞，它能够在不同诱导因子的作用下向不同方向分化，包括成骨方向的分化，本课题构建稳定表达BMP-7的重组腺病毒载体，并观察其对MSCs增殖和分化的影响，为BMP-7成熟应用于体内提供实验基础。 第一部分：重组腺病毒表达载体的构建 1．构建重组腺病毒表达载体AdCMV-BMP-7。首先将BMP-7序列插入到穿梭载体pAdTrack中，然后利用体内同源重组原理，在BJ5183细胞内与病毒骨架AdEasy完成同源重组，纯化的重组腺病毒线性化后转染包装细胞，经二次感