论文部分内容阅读
目的:研究不同时期辣椒素(CAP)对吲哚美辛致胃黏膜损伤的作用及机制。方法:分别给予大鼠CAP1mg/kg/d2周、4周进行预处理后,再给予大鼠吲哚美辛40mg/kg1次造成胃黏膜损伤模型,观察CAP对吲哚美辛致大鼠胃黏膜损伤的影响,具体方法如下:1.分组方法:SD大鼠80只,随机分为8组,每组10只。实验分两期完成,Ⅰ期为2周,Ⅱ期为4周,分别为A1组(空白对照1组)、A2组(空白对照2组)、B1组(模型1组)、B2组(模型2组)、C1组(CAP1组)、C2组(CAP2组)、D1(CAP+吲哚美辛1组)、D2组(CAP+吲哚美辛2组)。Ⅰ期:A1组予以生理盐水10ml/kg/d灌胃,2周后予以生理盐水10ml/kg灌胃1次;B1组予以生理盐水10ml/kg/d灌胃,2周后予以吲哚美辛40mg/kg灌胃1次;C1组予以CAP1mg/kg/d灌胃,2周后予以生理盐水10ml/kg灌胃1次;D1组予以CAP1mg/kg/d灌胃,2周后予以吲哚美辛40mg/kg灌胃1次。Ⅱ期:A2组予以生理盐水10ml/kg/d灌胃,4周后予以生理盐水10ml/kg灌胃1次;B2组予以生理盐水10ml/kg/d灌胃,4周后予以吲哚美辛40mg/kg灌胃1次;C2组予以CAP 1mg/kg/d灌胃,4周后予以生理盐水10ml/kg灌胃1次;D2组予以CAP1mg/kg/d灌胃,4周后予以吲哚美辛40mg/kg灌胃1次。2.CAP干预方法:实验中于每日上午8时给予C1组、C2组、D1组、D2组大鼠CAP1mg/kg灌胃1次,结束后大鼠自由进食和饮水。3.吲哚美辛造模方法:B1组、B2组、D1组、D2组大鼠最后一次灌胃结束后禁食不禁水24小时,然后予以吲哚美辛40mg/kg灌胃一次。4.检测指标及方法:处死大鼠后,收集胃液采用酸碱滴定法测定胃酸总酸度,按Guth标准改良评分[1]进行肉眼计数胃黏膜损伤指数;将胃窦组织修剪为0.5cm×0.5cm大小,共取4块,取1块胃窦组织用于HE染色行组织病理学观察并根据Masuda标准[2]对胃黏膜病理损伤程度进行评分,并用于免疫组化法检测胃黏膜辣椒素受体(TRPV1)、降钙素基因相关肽(CGRP)的表达及积分;取1块胃窦组织匀浆后按硫代巴比妥酸(TBA)法检测胃组织丙二醛(MDA);取1块胃窦组织匀浆后按氮蓝四唑(NBT)法检测胃组织超氧化物歧化酶(SOD);取1块胃窦组织匀浆后按双抗体夹心法检测胃组织前列环素(PGI2)水平。结果:1.动物情况:实验中各组大鼠精神良好,行动灵活,进食正常,大小便正常,未出现互相撕咬情况,8组大鼠均无死亡。2.肉眼下观察大鼠胃黏膜形态学改变及损伤评分:A1组大鼠胃黏膜呈橘红色,表面光滑,无充血水肿,未见损伤,未见血性积液;A2组大鼠胃黏膜呈橘红色,表面光滑,无充血水肿,未见损伤,未见血性积液;B1组大鼠胃黏膜充血、水肿明显,有大量点状出血、线状出血或条状糜烂灶,胃黏膜表面附着血痂,胃液呈咖啡色,部分可见血性积液;B2组大鼠胃黏膜充血、水肿明显,有大量点状出血、线状出血或条状糜烂灶,胃黏膜表面附着血痂,胃液呈咖啡色,部分可见血性积液;C1组大鼠胃黏膜呈橘红色,表面光滑,无充血水肿,未见损伤,未见血性积液;C2组大鼠胃黏膜呈橘红色,表面光滑,无充血水肿,未见损伤,未见血性积液;D1组大鼠胃黏膜充血水肿,表面附着血痂,可见部分点状糜烂灶、部分条状糜烂灶,胃液呈咖啡色;D2组大鼠胃黏膜损伤程度明显减轻,可见少许出血点及散在点状糜烂灶,胃液呈浅咖啡色,部分呈咖啡色。胃黏膜损伤评分分别为A1组:0.0±0.0,A2组:0.0±0.0,;B1组:39.90±5.70,:B2组:40.15±5.32,C1组:0.0±0.0,C2组:0.0±0.0,D1组:35.5±3.78,D2组:22.5±5.04,其中B1组胃黏膜损伤评分显著高于A1组(P<0.05)、C1组(P<0.05),B2组胃黏膜损伤评分显著高于A2组(P＜0.05)、C2组(P＜0.05)、D2组(P<0.05),D1组胃黏膜损伤评分显著高于A1组(P<0.05)、C1组(P<0.05)、D2组(P＜0.05),D2组胃黏膜损伤评分显著高于A2组(P<0.05)、C2组(P＜0.05)。3.大鼠胃窦黏膜病理组织学改变及损伤评分:A1组胃窦黏膜上皮细胞排列整齐、未见腺体结构紊乱;A2组胃窦黏膜上皮细胞排列整齐、未见腺体结构紊乱;B1组大鼠胃窦黏膜充血、出血、水肿明显,上皮细胞脱落,可见腺体结构紊乱;B2组大鼠胃窦黏膜充血、出血、水肿明显,上皮细胞脱落,可见腺体结构紊乱;C1组胃窦黏膜上皮细胞排列整齐,部分黏膜下血管可见充血,未见腺体结构紊乱;C2组大鼠胃窦黏膜上皮细胞排列整齐,部分黏膜下血管可见充血,未见腺体结构紊乱;D1组大鼠胃窦黏膜充血、出血、水肿,可见上皮细胞脱落,部分可见腺体结构紊乱;D2组大鼠胃窦黏膜充血、水肿较B组轻,可见上皮细胞脱落,未见腺体结构紊乱。大鼠胃窦黏膜病理组织损伤积分分别为A1组:0.0±0.0,A2组:0.0±0.0,B1组:5.50±2.12,B2组:5.45±2.07,C1组:0.0±0.0,C2组:0.0±0.0,D1组:5.20±2.25,D2组:2.13±0.99。其中B1组胃黏膜损伤评分显著高于A1组(P＜0.05)、C1组(P<0.05),B2组胃黏膜损伤评分显著高于A2组(P＜0.05)、C2组(P＜0.05)、D2组(P<0.05),D1组胃黏膜损伤评分显著高于A1组(P<0.05)、C1组(P<0.05)、D2组(P<0.05),D2组胃黏膜损伤评分显著高于A2组(P<0.05)、C2组(P<0.05)。4.胃酸总酸度(mmol/L):A1组:41.90±1.87,A2组:42.20±1.96,B1组:48.15±1.88,B2组:48.42±1.93,C1组:38.2±2.09,C2组:34.16±2.36,D1组:45.13±2.21,D2组:41.86±2.07。其中A1组胃酸总酸度高于C1组(P<0.05),A2组胃酸总酸度高于C2组(P<0.05),B1组胃酸总酸度显著高于A1组(P<0.05)、C1组(P<0.05)、D1组(P＜0.05),B2组胃酸总酸度显著高于A2组(P<0.05)、C2组(P<0.05)、D2组(P＜0.05),C1组胃酸总酸度显著高于C2组(P<0.05),D1组胃酸总酸度显著高于A1组(P＜0.05)、C1组(P<0.05)、D2组(P<0.05),D2组胃酸总酸度显著高于C2组(P＜0.05)。5.胃窦组织MDA含量(nmol/mg prot):A1组:1.51±0.07,A2组:1.52±0.08,B1组:3.88±0.17,B2组:3.91±0.21,C1组:1.49±0.06,C2组:1.47±0.08,D1组:3.78±0.19,D2组:2.75±0.23。其中B1组MDA含量显著高于A1组(P<0.05)、C1组(P<0.05),B2组MDA含量显著高于A2组(P＜0.05)、C2组(P＜0.05)、D2组(P<0.05),D1组MDA含量显著高于A1组(P<0.05)、C1组(P＜0.05)、D2组(P<0.05),D2组MDA含量显著高于A2组(P<0.05)、C2组(P<0.05)。6.胃窦组织SOD活力(u/mg prot):A1组:151.05±16.76,A2组:150.54±15.85,B1组:100.48±9.69,B2组:101.48±9.85,C1组:148.58±16.82,C2组:155.57±13.18,D1组:113.86±11.63,D2组:123.54±9.93。其中B1组SOD活力显著低于A1组(P<0.05)、C1组(P<0.05)、D1组(P<0.05),B2组SOD活力显著低于A2组(P<0.05)、C2组(P<0.05)、D2组(P＜0.05),D1组SOD活力显著低于A1组(P＜0.05)、C1组(P<0.05),D2组SOD活力显著低于A2组(P<0.05)、C2组(P<0.05)。7.胃窦组织PGI2含量(ng/L):A1组:172.16±19.82,A2组:170.72±18.72,B1组:113.74±17.99,B2组:110.95±16.58,C1组:225.14±16.96,C2组:259.49±19.48,D1组:132.55±16.05,D2组:163.11±23.32。其中A1组PGI2含量显著低于C1组(P<0.05),A2组PGI2含量显著低于C2组(P＜0.05),B1组PGI2含量显著低于A1组(P＜0.05)、C1组(P<0.05)、D1组(P＜0.05),B2组PGI2含量显著低于A2组(P<0.05)、C2组(P<0.05)、D2组(P＜0.05),C1组PGI2含量显著低于C2组(P<0.05),D1组PGI2含量显著低于A1组(P<0.05)、C1组(P＜0.05)、D2组(P<0.05),D2组PGI2含量显著低于C2组(P<0.05)。8.大鼠胃窦黏膜TRPV1、CGRP表达情况及评分:大鼠胃窦黏膜内TRPV1、CGRP阳性产物在各组中均有表达,产物主要位于细胞浆内。(1)大鼠胃窦黏膜TRPV1表达情况:A1组阳性产物颜色可见浅黄色或黄色,分布可见稀疏或中等;A2组阳性产物颜色可见浅黄色或黄色,分布可见稀疏或中等;B1组阳性产物颜色为浅黄色,分布可见稀疏或中等;B2组阳性产物颜色为浅黄色,分布可见稀疏或中等;C1组阳性产物颜色为黄色,分布可见中等或密集,部分分布稀疏;C2组阳性产物颜色可见黄色或棕黄色,分布可见密集或特别密集,部分分布中等;D1组阳性产物颜色可见浅黄色或黄色,分布可见中等或密集,部分分布稀疏;D2组阳性产物颜色可见黄色或棕黄色,分布可见中等或密集,部分特别密集。大鼠胃窦黏膜TRPV1表达评分分别为A1组:1.38±0.52,A2组:1.36±0.48,B1组:1.33±0.50,B2组:1.35±0.53,C1组:2.25±0.71,C2组:3.38±0.74,D1组:2.13±0.64,D2组:3.25±0.71。其中A1组TRPV1表达评分显著低于C1组(P<0.05)、D1组(P<0.05),A2组TRPV1表达评分显著低于C2组(P<0.05)、D2组(P<0.05),B1组TRPV1表达评分显著低于C1组(P<0.05)、D1组(P<0.05),B2组TRPV1表达评分显著低于C2组(P<0.05)、D2组(P<0.05),C1组TRPV1表达评分显著低于C2组(P＜0.05),D1组TRPV1表达评分显著低于D2组(P＜0.05)。(2)大鼠胃窦黏膜CGRP表达情况:A1组阳性产物颜色为浅黄色,分布可见稀疏或中等;A2组阳性产物颜色为浅黄色,分布可见稀疏或中等;B1组阳性产物颜色为浅黄色,分布可见稀疏或中等;B2组阳性产物颜色为浅黄色,分布可见稀疏或中等;C1组阳性产物颜色可见浅黄色或黄色,分布可见稀疏、中等或密集;C2组阳性产物颜色为黄色,部分可见棕黄色,分布可见中等、密集或特别密集;D1组阳性产物颜色为浅黄色,分布可见稀疏、中等或密集;D2组阳性产物颜色为浅黄色或黄色,部分可见棕黄色,分布可见中等、密集或特别密集。大鼠胃窦黏膜CGRP表达评分分别为A1组:1.30±0.76,A2组:1.32±0.75,B1组:1.20±0.42,B2组:1.23±0.45,C1组:2.0±0.67,C2组:3.1±0.74,D1组:1.90±0.74,D2组:2.9±0.73。其中A1组CGRP表达评分显著低于C1组(P<0.05)、D1组(P<0.05),A2组CGRP表达评分显著低于C2组(P<0.05)、D2组(P<0.05),B1组CGRP表达评分显著低于C1组(P＜0.05)、D1组(P＜0.05),B2组CGRP表达评分显著低于C2组(P<0.05)、D2组(P<0.05),C1组CGRP表达评分显著低于C2组(P＜0.05),D1组CGRP表达评分显著低于D2组(P＜0.05)。(3)大鼠胃窦黏膜TRPV1与CGRP表达的相关性分析:采用pearson相关性分析法检测胃窦黏膜TRPV1与CGRP表达的相关性,结果显示胃窦黏膜TRPV1与CGRP表达的相关系数为0.998,两者存在正相关关系(P<0.05)。结论:1.CAP1mg/kg/d连续灌胃2周、4周,对正常大鼠胃黏膜大体形态、病理组织学无损伤作用;2.预先给予CAP 1mg/kg/d连续灌胃4周具有预防吲哚美辛致大鼠胃黏膜损伤的作用;3.CAP 1mg/kg/d连续灌胃2周、4周降低大鼠胃酸总酸度;4.给予CAP 1mg/kg/d连续灌胃2周、4周增加TRPV1、CGRP在大鼠胃窦黏膜内的表达,增加大鼠胃窦组织PGI2含量,增加吲哚美辛造模后大鼠胃窦组织SOD活力,给予CAP 1mg/kg/d连续灌胃4周降低吲哚美辛造模后大鼠胃窦组织MDA含量。