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目的：从新疆盐生肉苁蓉中提取肉苁蓉总苷(Glycosides of cistanche, GCs)。建立Aβ25-35诱导Alzheimer病(AD)动物模型及细胞模型,探讨GCs对Aβ25-35所致Alzheimer病的影响及其机制。方法：1.采用小鼠脑室内一次性微量注射凝聚态Aβ25-35,建立拟AD样小鼠模型实验分组：假手术组、Aβ25-35模型组、VitE阳性药组(50mg·kg-1)、给GCs组(给药组)：GCs低剂量组(62.5mg·kg-1)、GCs中剂量组(125mg·kg-1)、GCs高剂量组(250mg·kg-1)。于造模手术前7天开始灌胃给药,共17天,术后10d,通过被动回避性跳台实验,测定AD小鼠的学习记忆能力；制备脑组织匀浆,按试剂盒方法检测脑组织SOD活性、MDA含量及GSH-Px活性；Tunel法检测脑细胞凋亡;免疫组化SABC法检测Bax/Bal-2水平的表达。2.采用脑立体定向技术向大鼠海马背侧处注射凝聚态Aβ25-35,建立拟AD样大鼠模型实验分组：假手术组、Aβ25-35模型组、VitE阳性药组(40mg·kg-1)、给GCs组(给药组)：GCs低剂量组(40mg·kg-1)、GCs中剂量组(80mg·kg-1)、GCs高剂量组(160mg·kg-1)。于造模手术前4天开始灌胃给药,共14天,术后10d,通过被动回避性跳台实验和电迷宫实验,测定AD大鼠的学习记忆能力；制备大鼠海马区组织匀浆,按试剂盒方法检测海马区组织SOD活性、MDA含量、GSH-Px活性及AchE活性；电子显微镜观察海马CA1区神经元超微结构及细胞内Ca2+含量;HE染色和Bielschowski’s镀银染色法观察海马CA1区神经元的病理变化；免疫组化技术测定大鼠海马CA1区神经元tau蛋白Ser199/202和ser396位点磷酸化水平的表达,免疫蛋白印迹技术检检测海马神经元tau蛋白Ser199/202和ser396位点磷酸化水平、磷酸化总tau蛋白水平的表达和磷酸化GSK-3β的活性变化。3.采用体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞,Aβ25-35诱导PC12细胞,建立AD细胞模型实验分组：正常对照组(PC12细胞)、Aβ25-35模型组(终浓度20μmol·L-1)、VitE阳性药组(终浓度10μmol·L-1)、GCs不同剂量组：低剂量组(终浓度为25μg·mL-1)、中剂量组(终浓度为50μg·mL-1)、高剂量组(终浓度为100μg·mL-1)。用甲氮甲唑蓝MTT法检测细胞存活率的变化、分光光度法检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、碘化丙啶(PI)和AnnexinV双标染色流氏技术(FCM)检测细胞凋亡率及用酶联免疫技术检测Caspase-3活性。结果：1.GCs对Aβ25-35所致Alzheimer病小鼠模型学习记忆的影响1.1在学习记忆实验中,模型组出现学习记忆障碍,错误次数明显多于假手术组(P<0.01),GCs中、高剂量组与模型组相比,显著减少错误次数(P<0.01)；模型组与假手术组相比脑组织SOD活性降低、MDA含量增高,GSH-Px活性降低(P<0.01),GCs中、高剂量组与模型组相比脑组织SOD活性增高,MDA含量降低,GSH-Px活性升高(P<0.01),结果接近阳性对照组；1.2 Aβ25-35注射小鼠侧脑室10天后,光镜下观察,模型组脑组织内有许多凋亡细胞,Bax表达增强,Bcl-2表达减弱。GCs低、中、高各剂量组脑组织内凋亡细胞明显少于模型组；Bax表达减弱,Bcl-2表达增强而抑制细胞凋亡2.肉苁蓉总苷对Aβ25-35所致Alzheimer病大鼠海马神经元损伤的保护作用研究2.1在大鼠学习记忆的试验中：与假手术组相比,模型组大鼠对电刺激的反应时间延长、错误次数明显增多(P<0.01),海马组织SOD活性降低,MDA含量增高,GSH-Px活性降低及AchE活性增高(P<0.01))；与模型组相比,GCs低、中、高各剂量组反应时间缩短,错误次数减少(P<0.01)；海马组织SOD活性升高,MDA含量降低,GSH-Px活性升高及AchE活性降低(P<0.01,P<0.05)；2.2 GCs对Ca2+含量的影响：GCs低、中、高各剂量组可使Aβ25-35所致AD模型大鼠海马CA1区中细胞内Ca2+含量降低；2.3 GCs显微结构的影响2.3.1 HE染色：对海马神经元在光学显微镜下观察,模型组可见大量、散在的凋亡细胞,表现为细胞质浓缩,呈淡红色；个别可见核碎裂,核固缩深染,核仁消失现象；神经纤维增粗,肿胀成宽带状或条索状结构。GCs组与假手术组比较,海马CA1区神经元结构基本正常,未见凋亡坏死细胞,结构接近于假手术组。2.3.2 Bielschowski’s镀银染色：结果显示模型组海马神经原纤维走行紊乱,增粗、肿胀融合成宽带状,轴突深染,细胞明显损伤,局部神经元大段缺失。GCs各剂量组处理后,海马CA1区神经元损伤明显减轻,神经元结构较完整,神经原纤维排列较规则,神经原纤维无明显增粗、肿胀,尤其是GCs高剂量组,组织结构基本接近于假手术组及阳性对照组。2.3.3电子显微镜观察海马CA1区超微结构：结果显示模型组大鼠海马神经元细胞核明显损伤,细胞基质不均匀,线粒体断裂,有空泡、畸形。突触结构模糊,突触数量减少,神经原纤维排列紊乱,有交错排列,类似神经原纤维缠结现象；GCs不同剂量组与模型组比较,神经元细胞核园,核仁明显,核膜完整,线粒体结构完整,突触丰富,突触数量增多,神经原纤维排列较整齐,接近假手术组及阳性对照组。2.4模型组海马神经元tau蛋白Ser199/202和Ser396位点的磷酸化水平明显高于假手术组(P<0.01),总tau蛋白的磷酸化表达水平也明显增高(P<0.01),磷酸化的GSK-3β的活性明显高于假手术组(P<0.01)；GCs给药组,大鼠海马组织总tau蛋白的磷酸化表达水平下降,tau蛋白Ser199/202和Ser396位点的磷酸化水平明显低于模型组(P<0.01),磷酸化的GSK-3β的活性也明显低于模型组(P<0.01),接近于阳性对照组。3.肉苁蓉总苷对Aβ25-35诱导AD细胞模型的神经保护作用结果与正常对照组比较,模型组显著降低PC12细胞存活率,明显提高48h细胞LDH的漏出量,并显著增加细胞凋亡率,升高Caspase-3的活性(P<0.01,P<0.05)。GCs低、中、高各剂量组与模型组比较,能显著提高细胞的存活率,明显降低48h细胞LDH的漏出量,并降低细胞凋亡率,显著降低Caspase-3的活性(P<0.01,P<0.05),接近阳性对照组。抑制细胞凋亡,发挥对神经细胞的保护作用。结论：1.通过Aβ25-35诱导的拟AD样模型动物的学习记忆功能障碍,自由基清除酶活性降低,脂质过氧化反应增强,细胞凋亡,GSK-3β-P的活性增强,总tau蛋白Ser199/202和ser396位点磷酸化水平的表达增强,引起海马神经元Bielschowski’s镀银染色及超微结构的病理特征。说明AD模型制备成功。2.GCs提高拟AD样动物模型的学习记忆能力,改善认知功能障碍,减轻受损细胞的病理改变及海马神经元超微结构的损害,其作用机制可能与其增强自由基清除酶活性,防止脂质过氧化反应,保护神经细胞膜；降低AchE的活性,增强胆碱能神经功能,改善学习记忆功能障碍；并使Bax表达减弱,Bcl-2表达增强,而抑制细胞凋亡,保护神经细胞免受Aβ25-35的损害,逆转AD的病理改变。3.GCs抑制GSK-3β-P的活性,降低tau蛋白Ser199/202和Ser396位点磷酸化水平的表达,维持脑细胞微管的结构,进而抑制NFT的形成,对Aβ25-35诱导拟AD样病变大鼠海马神经元具有明显的保护作用。在AD细胞模型中,GCs通过降低细胞凋亡的关键酶Caspase-3的活性,阻断细胞凋亡通路,保护受Aβ25-35损伤的细胞。GCs抑制GSK-3β-P和Caspase-3的活性的作用,是GCs发挥抗AD样作用的新靶点,其在AD的防治中具有潜在的理论价值。