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目的观察加味水陆二仙丹对T2DM模型大鼠IR的影响及其分子机制的进一步研究。方法以长期高糖高脂饮食喂养加小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射的方法复制实验性2型糖尿病大鼠动物模型。应用中药加味水陆二仙丹(高、中、低浓度)对其进行干预,以西药罗格列酮作为对照药,观察药物对T2DM模型大鼠一般状况、糖脂代谢、糖耐量、胰岛素敏感性、骨骼肌病理形态学等影响。同时为了深入了解其分子机制,测定IRS-1、PI3Kp85、GLUT4在骨骼肌组织中的mRNA基因表达与蛋白表达水平。结果①糖脂代谢方面,造模后模型组大鼠与正常组相比,FPG有显著增加,糖耐量试验也明显异常。加味水陆二仙丹中剂量具有一定程度的降低FPG的作用,且可降低糖尿病大鼠糖负荷后的血糖上升,改善糖耐量(OGTT试验表明中药中浓度组的曲线明显低于其他组),同时HOMA-IR与西药组有一定差异,从而发挥其抑制糖毒性的作用,延缓T2DM及IR的病程的发展。本研究中,模型组大鼠TC、TG、LDL-C水平与正常对照组相比明显升高,且组织取材过程中,可明显观察到肝脏组织存在大量脂肪粒或脂肪块,己出现肝脏脂肪病变,表明模型组大鼠肝脏存在脂代谢紊乱,这一结果与模型大鼠血脂异常的结果是一致的。经过药物干预4周后,加味水陆二仙丹各剂量均可降低大鼠的TC、TG及LDL-C的水平,而对]HDL-C几乎没有作用,其中中药中浓度及低浓度效果最为明显,与西药组有差异。且肉眼观察到肝脏组织存在不同程度的脂肪病变,但程度较模型组轻。因此,加味水陆二仙丹具有改善脂质代谢的作用,抑制IR的进程,进而可延缓T2DM发展。②免疫组化方面,模型组大鼠骨骼肌组织IRS-1Ser307磷酸化明显增强,同时IRS-1蛋白表达量显著下降,提示小剂量STZ加高脂高热量饮食诱导可以刺激大鼠外周组织IRS-1丝氨酸磷酸化,减少IRS-1蛋白的表达,其下游信号分子P13K p85和GLUT4蛋白的表达也明显降低。提示2型糖尿病大鼠的外周组织中,胰岛素刺激的GLUT4向细胞膜的转位较少,进而影响外周组织细胞对葡萄糖的摄取,导致IR的产生。罗格列酮和加味水陆二仙丹干预均可部分逆转这种变化,具体表现为抑制IRS-1Ser307磷酸化,提高IRS-1, PI3K p85蛋白的表达,促进GLUT4转位至细胞膜上,增加细胞膜GLUT4含量,提高外周组织对葡萄糖的利用率从而改善IR。③基因及蛋白表达水平方面,本研究应用RT-PCR及western blot方法检测加味水陆二仙丹对T2DM大鼠骨骼肌组织中IRS-1、PI3K p85、GLUT4基因mRNA表达及蛋白含量,与模型组比较,结果显示加味水陆二仙丹中剂量组可促进骨骼肌组织的IRS-1、PI3K p85、GLUT4 mRNA和蛋白的表达,两者变化是同向的。药物干预后起到了胰岛素增敏剂作用,可以增加骨骼肌中GLUT4 mRNA表达,提高蛋白水平,提示加味水陆二仙丹可能通过增加IRS-1 mRNA和蛋白表达量,介导了P13K信号途径,从而启动下游基因GLUT4的转录,提高GLUT4蛋白水平,使翻译的葡萄糖转运子增多,细胞转运葡萄糖的能力增强,改善T2DM大鼠的IR。结论①加味水陆二仙丹可以改善T2DM模型大鼠的糖脂代谢紊乱,提高胰岛素敏感性;②加味水陆二仙丹能够改善T2DM大鼠骨骼肌组织病理学形态;③加味水陆二仙丹可通过增加骨骼肌IRS-1 mRNA和蛋白表达量,介导了IRS-1/P13K/GLUT4信号途径,从而增强下游GLUT4基因的转录,细胞转运葡萄糖的能力增强,最终改善2型糖尿病大鼠的IR,从而治疗T2DM。本课题从多环节、多靶点研究了加味水陆二仙丹改善2型糖尿病IR的作用机理,对阐发中药作用机制进行了有益探索。