【摘 要】
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本文以忍冬桑黄和蛹虫草共发酵联产真菌多糖为主要目标,对共发酵方式、共发酵培养基及发酵条件进行了研究,并对共发酵所得菌丝体多糖提取进行了试验,在此基础上,比较了单菌和共发酵菌丝体中主要活性成分含量和多糖组份的抗氧化活性差异。主要研究结果如下:1.建立了忍冬桑黄和蛹虫草预先各发酵3d和1d,再合并发酵产多糖的共发酵模式。通过单因素试验确定了影响两菌共发酵联产真菌多糖得率的关键培养基组分为可溶性淀粉（A
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本文以忍冬桑黄和蛹虫草共发酵联产真菌多糖为主要目标,对共发酵方式、共发酵培养基及发酵条件进行了研究,并对共发酵所得菌丝体多糖提取进行了试验,在此基础上,比较了单菌和共发酵菌丝体中主要活性成分含量和多糖组份的抗氧化活性差异。主要研究结果如下:1.建立了忍冬桑黄和蛹虫草预先各发酵3d和1d,再合并发酵产多糖的共发酵模式。通过单因素试验确定了影响两菌共发酵联产真菌多糖得率的关键培养基组分为可溶性淀粉（A）、牛肉粉（B）、磷酸氢二钾（C）、硫酸镁（D）。基于Box-Behnken试验设计原理和响应面分析法对忍冬桑黄和蛹虫草共发酵联产真菌多糖发酵培养基的关键组分进行了优化,得到了共发酵联产真菌多糖的预测模型:Yi=480.52+78.64A+12.69B-13.08C-23.95D-2.5 1 AB+9.41AC-5.93 AD+1.75BC+6.82BD+13.26CD-85.72A2-154.27B2-129.03C2-110.55D2。预测出最佳培养基组成为:可溶性淀粉32.20g/L,牛肉粉12.07g/L,磷酸氢二钾1.11g/L,硫酸镁0.36g/L。对模型有效性的验证试验表明,总多糖得率实测值与预测值非常接近,表明模型有效。2.在共发酵培养基优化基础上,通过单因素试验和Plackett-Burman试验设计确定了忍冬桑黄和蛹虫草共发酵联产真菌多糖发酵条件的关键影响因素:接种量（A）、培养温度（B）、起始pH（C）。基于Box-Behnken试验设计原理和响应面分析法对影响忍冬桑黄和蛹虫草共发酵联产真菌多糖的关键发酵条件进一步优化,得到了可预测忍冬桑黄和蛹虫草共发酵联产真菌多糖发酵条件的回归模型:Y2=1045.87-45.98A+126.66B+50.42C+62.52AB-8.68AC-26.17BC-213.76A2-119.93 B2-305.91C2。进一步分析参数,获得共发酵联产真菌多糖最佳的发酵条件为:接种量19.86%,培养温度30.05℃,起始pH=7.06。为便于实际操作实验,将参数修正为接种量20%,温度30℃,pH=7。根据修正后的发酵条件进行验证试验,得到实际测定值为1071.47±9.32mg/L,与预测值1080.64mg/L基本一致,模型有效。3.对忍冬桑黄和蛹虫草共发酵所得菌丝体中的多糖提取进行了研究,结果表明,超声波提取法提取效率最高,得到的最佳提取工艺为:料液比选择1:50（g/mL）;超声波功率选择320W;超声波时间选择50min。比较了 Sevage法、三氯乙酸法、HCl法和CaCl2法四种方法对多糖进行脱蛋白的效果,综合考虑选择选用CaCl2法脱蛋白,当氯化钙含量为5%时,多糖得率为93.66%,脱蛋白率为90.7%。脱色选用大孔树脂HD-3。4.比较了单菌和共发酵所得菌丝体中主要活性成分多糖、三萜和黄酮的含量,结果显示,共发酵所得菌丝体中多糖、三萜及黄酮的含量均显著高于单个菌的含量。比较了单菌和共发酵所得菌丝体多糖的抗氧化活性,分别测定了对DPPH自由基的清除率、羟基自由基的清除率和超氧阴离子自由基的清除率。结果表明,共发酵菌丝体多糖对三种自由基清除率均达到65%左右,显著高于单个菌种多糖的抗氧化活性,表明共发酵菌丝体多糖具有良好的抗氧化活性,有一定的开发利用价值。比较了三种菌丝体多糖通过DEAE-纤维素柱层析的洗脱情况,初步证明共发酵所得多糖与单个菌株发酵所得多糖的组份有差异。
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