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2腋淋巴结(Axillary Lymph Node, ALN)状态是影响乳腺癌患者预后的最重要因素,也是术前选择手术方式、术后选择辅助治疗的重要依据。在西方国家,前哨淋巴结活检(sentinel lymph node biopsy, SLNB)、淋巴结抽样(Axillary Node Sampling, ANS)虽然都已用于预测腋淋巴结状况,但包括淋巴结定位和术中淋巴结检测的最佳方案仍存在争议。本研究分为二部分,分别对淋巴结活检、术中淋巴结检测的合理化方案进行探讨:第一部分研究二种注射途径——癌周(Peritumoral, PT)、乳晕下(SA, Subareolar)对染料法SLNB的影响,以及染料法SLNB与染料法SLNB联合ANS预测腋淋巴结的准确性。第二部分探讨术中微转移检测的最佳方法。第一部分:连续收集64例临床Ⅰ～Ⅱ期乳腺癌患者,随机分入SA、PT组。患者麻醉成功后,取1%亚甲蓝(Methylene Blue, MB)5ml注入乳晕周围12点、3点、6点和9点部位皮下或肿瘤周围深部。注射染料后10min,切开皮肤及皮下组织,游离上侧皮瓣至腋窝第Ⅰ水平,寻找、切除蓝染淋巴结,认定为前哨淋巴结(Sentinel Lymph Node, SLN)。无论SLNB成功与否,均在胸小肌外缘(Ⅰ水平),以腋淋巴结抽样(Axillary Node Sampling, ANS)方式触诊、切除4个可疑淋巴结。分别标记SLN和抽样淋巴结,单独送快速病理检查。然后行腋窝淋巴结清扫(Axillary Lymph Node Dissection, ALND),腋清扫淋巴结送常规病理检查。应用亚甲蓝进行SLNB时,SA组的成功率、假阴性率、灵敏性、准确性分别为84.9% (28/33)、13.6% (3/3+19)、86.4% (19/3+19)、100%(28/28);PT组分别为61.3% (19/31)、36.8% (7/7+12)、63.2% (12/7+12)、100% (19/19),SA、PT组之间的差异具有显著性(p<0.05)。不考虑注射部位时,SLNB的灵敏性、特异性、准确性、假阴性分别为100%、48.5%、63.8%、24.3%;SLNB+ANS则分别为100%、52.3%、67.2%、0%。结果显示在行SLNB时,SA法成功率稍高于PT法;染料法SLNB+ANS的阳性淋巴结检出率高于单用染料法SLNB的检出率。第二部分:应用冰冻切片(Frozen Section, FS)、快速免疫组化(Rapid Immuno-histochemistry, RAPID-IHC)、逆转录聚合酶链反应(Reverse Transcriptase Polyme- rase Chain Reaction, RT-PCR)检测SLN、抽样淋巴结内的转移。以5μm厚度从间隔为50μm的二个层面上对淋巴结冰冻组织连续切取3张切片,1张行HE染色,另外2张行RAPID-IHC,标志物分别为CK19、muc1。冰冻剩余组织行RT-PCR。64例患者用冰冻切片HE、IHC、RT-PCR共检查了348个淋巴结,其中冰冻切片HE染色在37例患者中检出139个转移淋巴结;RAPID-IHC在41例患者中检出152个转移淋巴结。SLNB/ANS术中病检阴性的患者中,RT-PCR检测发现有3个淋巴结表达CK19、mammaglobin,1个SLN同时表达CK19、mucl、mammaglobin。结果显示RT-PCR的灵敏性与冰冻切片HE+RAPID-IHC相当或稍高一些,但由于肿瘤标志物在正常组织中也有少量表达,而且用分子学方法检出转移的临床意义尚不明确,目前,冰冻切片HE+ RAPID-IHC检查是术中病理检查较好的一种选择。但由于本研究样本含量较小,还需要大样本随机对照研究进一步证实。