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前言 恶性肿瘤组织具有局部浸润和远处转移能力。诱导血管生成是这种能力的前提之一。一般来说，肿瘤的转移包括以下五步：肿瘤血管生成，肿瘤细胞粘附于内皮细胞，局部基底膜被降解破坏，肿瘤细胞迁移到继发部位，肿瘤细胞在继发部位增殖。可以看出，肿瘤的血管生成在肿瘤转移过程中发挥着关键作用。因此，探讨血管生成抑制剂对抑制肿瘤转移的作用，对肿瘤的治疗可能具有重要意义。 TNP-470是一种特异性的血管生成抑制剂，它可以抑制内皮细胞的增生。动物实验研究表明，其对多种肿瘤组织的生长与转移有抑制作用。已有大量文献从不同水平对TNP-470的作用机制进行了研究。目前对TNP-470抑瘤机制的解释主要认为与其抑制肿瘤血管生成有关。本实验探讨TNP-470对肺癌细胞与内皮细胞之间粘附的影响及对内皮细胞粘附分子VCAM-1，肺癌细胞粘附分子CD44V6，基质金属蛋白酶MMP-2，MMP-3表达的影响，来进一步阐明TNP-470抑制肿瘤转移的机制，并且检测TNP-470与白细胞介素-2（IL-2）联合应用的效应是否优于各自单独用药，对肿瘤的综合治疗具有临床指导意义。 方法 采用改进的Jaffe法将人脐静脉内皮细胞（HUVEC）培养在96孔培养板上，待细胞融合后，加入肿瘤细胞悬液（105个／ml）。将HUVEC分成12组：阴性对照组（不加肿瘤细胞悬液）；阳性对照组；空白对照组（不加TNP-470或IL-2）；IL-2组（1000U／ml）；10-6g／mlTNP-470组；10-6g／mlTNP-470+IL-2（1000U／ml）组；10－V呐TNP－470组；10－VM TNP－470＋IL－2 （1000／Inl）组；10－＊ g／M TNP－470组；10－＊ g／ml TNP－470＋IL－2（1000U／Inl）组；10－pg／Inl TNP－470组；10－口g／Inl TNP－470＋IL－2O000U／Inl)组，用 MTh法检测肿瘤细胞和内皮细胞间的粘附率。分别将内皮细胞和肿瘤细胞种植在玻片上，用免疫组织化学方法检测内皮细胞VCAM－1，肺癌细胞CD44VO·MMP－2，MMP－3的表达，采用阳性细胞计数法及图象分析法对结果进行分析。 结 果 不加 TNP－470或几－2组，肿瘤细胞与内皮细胞间的粘附率为7二．7士5．4％。在m－“夯＊一m－‘，d范围内，TN P一470随着浓度的升高，肿瘤细胞与内皮细胞间粘附率呈下降趋势(P＜0．05厂应用几－2门／Inl川两种细胞间的粘附率与对照组相匕，显著下降（P＜0．05）。TNP－470和几－二联合应用组与各自单独作用组相比，两种细胞间粘附率显著下降u＜0．05人免疫组织化学结果显示，随着TNP－470浓度的升高，内皮细胞膜上＊＊＊M－1的阳性率逐渐降低（P＜O．05），月瘤细胞膜上＊侧几的阳性率逐渐降低(P＜O．05人对肿瘤细胞胞浆＊＊P－2，＊＊P－3的染色结果进行图象分析，结果显示TNP－470浓度的变化对肿瘤细胞中＊＊P－2，＊＊P一3的表达无明显影响(P＞0．05八 讨 论 肿瘤的生长与转移具有血管依赖性。TNP－470是一种特异性血管生成抑制剂，它可以抑制多种肿瘤的生长与转移。动物实验表明其主要作用靶点是正常内皮细胞的细胞周期，它可以特异性阻断正常内皮细胞进人细胞周期的 G；期，使 GO期细胞所占比例上升。但对其抑制肿瘤转移机制的研究尚有一些不明之处。IL－2是近年在肿瘤治疗方面应用较广的细胞因子，它是机体内最 ·2·重要，最强有力的T细胞生长因子，其通过复杂的免疫调节机制使机体表现出抗肿瘤功能。然而，高浓度的IL－二具有显著的细胞毒作用，从而限制了它的临床应用。关于TNP－470与其它治疗手段联合应用进行肿瘤的综合治疗问题已有一些相关报道。但尚未见TNP－470与几－2联合应用的报道。本实验旨在探讨TNP－470和／或IL－2抑制肿瘤细胞与内皮细胞间粘附的作用及其机制；并且联合应用TNP－470和几－2，探讨其效应是否大于各自单独用药，为肿瘤的临床治疗提供实验依据。 本实验结果显示，TNP－470可以降低肿瘤细胞与内皮细胞之间的粘附率，并且在一定范围内具有剂量依赖性；联合应用TNP－470与IL－2的抑制效应分别大于各自单独用药。活化的内皮细胞膜VCAM－l及肿瘤细胞膜CMV。的表达，在TNP－470的作用下呈下降趋势，说明TNP－470对两种细胞间粘附的抑制作用可能与其对内皮细胞和肿瘤细胞表面粘附分子表达的抑制作用有关。TNP－470对肿瘤细胞 MMP－2，MMP－3的表达无明显影响。因MMP发挥作用与MMP的分泌和MMP的活性有关，所以TNP－470通过影响肿瘤细胞MMP对基底膜降解的效应尚需进一步探讨。 总之，肿瘤的转移是一个复杂、多步骤的过程，而对肿瘤转移的抑制同样具有复杂性。TNP—470对肿瘤转移的抑制作用可能通过多种机制的介导，尚需对TNP－470的抑瘤机理作进一步探讨。 结 论 1．TNP－470可以降低体外培养的肿瘤细胞与内皮细胞间的粘附率，并在一定范围内具有剂量依赖性。 2．TNP－470可以降低内皮细胞表面和肿瘤细胞表面粘附分子的表达，说明TNP－