氧化石墨烯双层防粘连纳米电纺膜的构建及其腹壁缺损修复应用研究

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【目的】腹部肿瘤切除术后、创伤、感染、切口疝等原因导致的腹壁缺损是临床常见难题。传统人工合成补片由于不可降解而易导致腹腔脏器粘连等系列并发症;而生物补片虽然生物相容性良好,但是力学强度欠佳,疝复发率较高。氧化石墨烯(Graphene oxide,GO)是硬度最高的碳纳米材料之一,将其与其他材料混合能够达到改善力学性能的效果。壳聚糖(Chitosan,CS)是贝类或者甲壳类的一种天然组成成分,具有止血、抗菌、防粘连等优点。因此,我们希望基于以上两种材料制备一种具有良好生物力学强度,可避免疝形成,并且能够防止粘连的补片,以用于腹壁缺损的修复。同时探讨可促进局部组织缺损修复的有效方法,以便为临床有效修复腹壁缺损提供参考。【方法】以聚己内酯(Polycaprolactone,PCL)为基本成分,通过静电纺丝技术首先制备含有不同浓度GO(0.1、0.5、1.0%w/v)的外层支架(GO-PCL),并对其进行系列理化性质和体外生物相容性鉴定,从中筛选出具有足够机械强度的最佳GO浓度支架用于后续试验。在此基础之上,制备内层支架(CS-PCL)覆盖于GO-PCL支架表面,获得复合双层支架(GO-PCL/CS-PCL)。最后,利用N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)中的羧基与CS中的氨基交联形成酰胺键,制备出载药复合双层支架(GO-PCL/NAC-CS-PCL)。本研究利用扫描电镜观察支架的表面形貌,通过拉曼光谱检测、弹性模量检测、药物释放试验及细胞相容性试验探讨了支架制备及应用于体内的可行性,并以单纯PCL、GO-PCL、GO-PCL/CS-PCL支架为对照,研究了GO-PCL/NAC-CS-PCL支架的腹壁缺损修复效果。【结果】通过上述方法,本研究成功制备了0.1%GO-PCL/NAC-CS-PCL复合双层支架。该支架具有纳米级别纤维网状结构,在20%形变范围内时,弹性模量比单纯PCL支架高约2倍,具有良好的生物力学性能。在该支架上,细胞黏附良好、形态伸展,呈现出良好增殖能力。当将支架应用于大鼠腹壁缺损模型修复时,0.1%GO-PCL/NAC-CS-PCL支架组没有观察到疝形成,且粘连形成较少,粘连评分为1.50±0.50分。而且,相较于0.1%GO-PCL/CS-PCL支架组,0.1%GO-PCL/NAC-CS-PCL支架组有更多的新生胶原沉积,CD31染色结果提示支架中心区域可见新生血管形成。【结论】0.1%GO-PCL/NAC-CS-PCL复合双层支架因其良好的生物力学性能、体外生物相容性,及其在大鼠腹壁缺损应用中展现出的良好修复效果,为腹壁缺损修复提供了一个新的选择。
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