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目的:进入二十一世纪后,随着免疫排斥反应研究的深入和免疫抑制剂的临床应用,器官移植得到了迅猛发展。目前肝移植已成为挽救终末期肝病和急性肝功能衰竭的最主要治疗方式和常规性手术。肝脏作为实体器官移植的免疫特惠器官,移植术后其排斥反应发生率较低,但是移植术后免疫抑制剂也成为临床常规应用,所以探讨临床肝移植术后患者的免疫抑制剂的使用和免疫状态的关系及其调节机理对提高肝移植患者的生存率有重要意义。已有研究发现在机体的移植排斥反应和免疫耐受诱导中T淋巴细胞是主要的免疫细胞之一,在免疫平衡中发挥着极其重要的调节和效应作用。特异性表达Foxp3并通过分泌IL-10和FGF-b等细胞内因子发挥功能的调节性T细胞(Treg)作为主要的免疫抑制细胞亚群,它与Th17细胞、Th1和Th2 T细胞一起构成了CD4~+T细胞的4个主要亚群。Th17细胞分泌IL-17、IL-22、IL-6等多种细胞因子,与Treg细胞相互抑制,二者的动态平衡在机体免疫防御和免疫自稳中起着重要作用。然而,目前关于肝移植术后患者在长期生存各个时期外周血淋巴细胞亚型的变化特点,尤其是Treg细胞和Th17细胞表达特点及变化特征,我们了解的知识有限。本课题以肝移植术后单服FK506的长期存活患者(即产生免疫耐受)为研究对象,检测了在一定FK506血药浓度下,不同时期患者外周血中CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞和Th17细胞的表达水平,以探讨调节性T细胞和Th17细胞在肝移植术后免疫调节中的作用及其与患者的存活时间之间的关系。方法:研究对象为自2002年至2015年在我院肝胆外科行原位肝移植术的长期存活患者及健康对照组。纳入标准:1术前诊断为乙型肝炎后肝硬化的患者2术后仅接受FK506的单联治疗方案3术后无严重感染、高血压、急慢性排斥反应、糖尿病、肝肾功能减退、冠心病等并发症的患者4术前及术后无系统性炎症和自身免疫性疾病患者5施行经典原位肝移植的手术方式。健康志愿者为近期无外伤史、感染病史、无自身免疫性疾病史、无肝脏相关疾病史者。排除标准:1曾发生过相关并发症,如排斥反应、感染等2基本信息资料不全者和没有全程随访的患者3拒绝接受临床相关检测检查者。根据上述标准共入组患者42例。按患者存活时间分为Tac1组(肝移植术后存活6月-3年组,15例)、Tac2组(肝移植术后存活3年-10年组,15例)、Tac3组(肝移植术后存活10年以上组,12例),CG组(健康对照组)均从健康体检者中选取,共20例。采集肝移植术后存活各时期病人的外周血,采用全自动生化分析仪测定血清中丙氨酸转氨酶(ALT),天冬氨酸转氨酶(AST),白蛋白(ALB),谷氨酰转肽酶(GGT)的水平,化学发光微粒子免疫检测法测定了FK506血药浓度,荧光标记单克隆抗体的流式细胞分析术检测了CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞和Th17细胞的表达水平。采用SPSS 22.0统计软件进行分析,计量资料以均数±标准差(`x±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),计数资料采用R×C的c2检验。P<0.05示差异有统计学意义。结果:1肝移植术后不同存活时期患者的肝功能检验指标(ALB、AST、ALT、GGT)虽然均在正常范围之内,但ALT指标出现如下变化,Tac1组和CG组的相比升高明显且有统计学意义(P<0.05),随生存时间的延长该指标逐渐下降,Tac2组和Tac3组与CG组相比无统计学差异(P>0.05),此结果显示肝移植术后患者无明显临床排异反应。2肝移植术后不同存活时期患者T淋巴细胞亚群的变化特点:CD3~+CD4~+T细胞百分数及CD4~+/CD8~+T细胞比值:Tac1、Tac2和Tac3组明显低于CG组(P<0.05);CD3~+CD8~+T细胞Tac3组明显高于CG组、Tac1、Tac2组(P<0.05);CD3~+T细胞、NK细胞各组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结果显示与正常人相比,肝移植术后长期存活患者各个时期CD3~+CD4~+T细胞处于较低水平。3肝移植术后不同存活时期患者CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的表达水平:Tac1组(4.82%±0.29%)明显低于CG组(5.66%±0.32%)(P<0.05);Tac2组(1.46%±0.29%)、Tac3组(1.62%±0.35%)分别低于Tac1组和CG组(P<0.05);Tac2组和Tac3组比较差异无统计学意义(P>0.05)。此结果表明,CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞随肝移植术后患者生存时间的延长而呈现逐渐下降趋势,最终在相对较低水平维持。4肝移植术后不同存活时期患者Th17细胞的表达水平:Tac1组(1.95%±0.33%)、Tac2组(1.99%±0.36%)均明显高于CG组(1.49%±0.36%),差异有统计学意义(P<0.05);Tac1组、Tac2组、Tac3组(1.72%±0.29%)相互比较差异无统计学意义(P>0.05);Tac3组和CG组比较差异无统计学意义(P>0.05)。此结果显示Th17细胞在肝移植术后患者生存较早期升高,而随着时间延长恢复至正常人水平。结论:1在单服免疫抑制剂FK506的情况下肝移植术后患者,临床免疫耐受良好,但CD3~+CD4~+T细胞水平和CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞数较低,Th17细胞水平较高,这要求我们有必要对患者状况进行持续临床监测。2在单服免疫抑制剂FK506的情况下肝移植术后存活6月-3年、3年-10年、10年以上患者外周血中其外周血中CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞数随生存期的延长逐渐下降并维持在一个相对较低水平。3在单服免疫抑制剂FK506的情况下肝移植术后存活6月-3年、3年-10年患者外周血中,Th17细胞表达稍高水平,存活10年以上的患者Th17细胞水平又逐渐接近正常水平。