【摘 要】
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MarR家族是一种广泛存在于古菌和细菌中古老而重要的转录调节因子,在应激条件下负责基因表达的调控。SlyA蛋白是属于MarR家族的转录因子,在多种致病菌中调控菌体在宿主内的生
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MarR家族是一种广泛存在于古菌和细菌中古老而重要的转录调节因子,在应激条件下负责基因表达的调控。SlyA蛋白是属于MarR家族的转录因子,在多种致病菌中调控菌体在宿主内的生存能力和毒力因子的表达。而荧光假单胞菌属于重要的生防菌,其SlyA蛋白的调节机制和功能却鲜有报道。本文的研究以调节外排泵EmhABC的转录因子EmhR和SlyA存在共适应性为切入点,探究了荧光假单胞菌2P24中SlyA的调控机制和功能。我们发现SlyA可以调节EmhABC基因的表达,荧光假单胞菌2P24的slyA敲除株对部分抗生素的抗性降低了。而且SlyA是负调控自身基因表达的转录调控因子。SlyA以结合在被其调控基因的启动子的方式激活或抑制被调控基因的表达,其特异性识别结合的DNA序列通式为伪回文序列TTA-N6-TAA。本文也寻找了荧光假单胞菌2P24基因组中启动子区含有TTA-N6-TAA的基因,作为SlyA调控的候选基因。质谱数据分析显示slyA基因敲除株与phoP基因敲除株蛋白表达差异存在较高的平行性,在表型上均展示出生物膜形成能力的加强,slyA敲除株生物膜形成能力略强于phoP敲除株。而且slyA敲除株的游泳、涌动能力表现出极大的加强。在发现SlyA的身份之前,也曾寻找过SlyA的小分子配体,但以失败告终。文章末尾对于SlyA调控通路的报道进行总结,绘制了SlyA调控机制汇总图,希望能作未来研究方向的指导蓝图。关于本文的日后的研究方向有两个,一是寻找SlyA的上下游信号,确认上游信号是否是PhoQ-PhoP,并以分子生物学方法寻找SlyA调控的下游基因。二是以表型为切入点,探究哪些基因的直接调控这些性状,并确认菌体内这些基因与SlyA的关系。这两个方向殊途同归,最终绘制一幅关于SlyA蛋白完整的信号通路网络。
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