【摘 要】
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MYB(v-myb avian myeloblastosis viral)转录因子家族是植物中最重要的转录因子之一,可以调节植物的生长,与花青素、木质素、苯丙素等产物代谢相关,此外在植物信号转导、次生代谢调控和逆境应激等方面也发挥发挥着重要作用(如盐胁迫)。植物MYB转录因子根据R-repeat的数量分为四类,在逆境胁迫中主要是R2R3-MYB转录因子发挥作用。木麻黄(Casuarina equi
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MYB(v-myb avian myeloblastosis viral)转录因子家族是植物中最重要的转录因子之一,可以调节植物的生长,与花青素、木质素、苯丙素等产物代谢相关,此外在植物信号转导、次生代谢调控和逆境应激等方面也发挥发挥着重要作用(如盐胁迫)。植物MYB转录因子根据R-repeat的数量分为四类,在逆境胁迫中主要是R2R3-MYB转录因子发挥作用。木麻黄(Casuarina equisetifolia)因其抗台风、沙漠、干旱和盐碱的能力突出,被沿海地区作为防风林进行商业种植,是绿化滨海盐碱地的理想树种。目前,MYB转录因子参与木麻黄响应盐胁迫的分子机制鲜有报道,获得的研究结果如下:1.基于木麻黄基因组数据库,进行木麻黄MYB转录因子家族分析,与拟南芥Arabidopsis thaliana MYB氨基酸序列进行多序列比对,构建了系统进化树,共获得了25个亚家族,并进行了理化性质、基因结构和保守motif的分析。2.利用转录组测序的技术,筛选了300 m M盐胁迫前后差异表达的MYB转录因子,对根部上调显著的13个基因进行了q PCR验证,挑选了相对表达量>10倍的6个MYB基因,根据与拟南芥之间的进化关系分别命名为CeMYB80、CeMYB2、CeMYB15、CeMYB62、CeMYB110和CeMYB58进行下一步实验。3.对上一步挑选的基因上游2000bp启动子区进行了顺式元件分析,发现它们均含有ABRE元件,说明这些基因可能属于依赖于ABA信号途径激活的基因。4.亚细胞定位的结果说明,CeMYB80、CeMYB2、CeMYB62、CeMYB110和CeMYB58基因定位在细胞核上,符合转录因子蛋白的特征。5.构建了上述基因的过表达载体,转化了拟南芥,以及进行了大量的发根农杆菌介导的转基因毛状根和根癌农杆菌介导的稳定的转基因愈伤。转基因毛状根证明,正常条件下,植株生长无明显差异。盐处理下,转化空载的对照生长延缓,地上部分可见明显的萎蔫发黄,而转化35S::CeMYB80-GFP、35S::CeMYB2-GFP基因的植株茎尖有部分发黄,整体翠绿,相对于对照,表现出更强的耐盐性。结果证明,CeMYB80、CeMYB2可能参与木麻黄耐盐机制的调控。
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