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在我国,前列腺癌的发病率逐年提高。患者经内分泌治疗一段时间后,大部分前列腺癌细胞会转变为激素非依赖性细胞,此时治疗面临困难,最后会导致疗效不佳,因此寻求更有效的治疗方式十分重要。本研究着重于1,25 二羟基维生素D<,3>对人前列腺癌激素非依赖细胞株DU145和PC-3增殖、转移的影响,期望探索一种新的治疗前列腺癌的药物。本实验分为两个部分。
第一部分 1,25二羟基维生素D3对DU145和PC-3细胞生长的抑制作用
目的:
研究不同浓度1,25二羟基维生素D<,3>对前列腺癌激素非依赖性细胞株DU145和PC-3生长的抑制作用。
方法:将1,25二羟基维生素D<,3>加入DU145和PC-3培养基,1,25二羟基维生素D<,3>浓度分别为10<-6>mol/L、10<-8>mol/L和10<-10>mol/L,培养72小时后,显微镜下进行细胞记数及观察有无细胞凋亡,并与对照组作比较。
结果:经过1,25二羟基维生素D<,3>干预的DU145和PC-3细胞在1,25二羟基维生素D<,3>浓度分别为10<-6>mol/L和10<-8>mol/L的培养基中与对照组相比生长明显受抑制,其中在DU145细胞中抑制率分别为29.07%和12.79%;在PC-3细胞中抑制率分别为38.87%和19.12%,并且呈浓度依赖性,浓度越大,生长受抑制越明显(P<0.05);而在浓度极低的1,25二羟基维生素D<,3>为10<-10>mol/L的培养基中生长抑制不明显。三组干预浓度作用后的DU145和PC-3细胞均发生了凋亡。
结论:
1,25二羟维生素D<,3>在较低的浓度(10<-8>mol/L)便能抑制DU145和PC-3细胞生长,并且为浓度依赖性。抑制细胞的机制可能为促进凋亡。
第二部分1,25二羟基维生素D<,3>与前列腺癌转移抑制基因RIKP、PTEN、MKK4、nm23相关性的研究
目的:研究1,25二羟基维生素D<,3>对转移抑制基因RIKP、PTEN、MKK4、nm23的作用。
方法:提取经过1,25二羟基维生素D<,3>作用过的DU145和PC-3细胞的mRNA,进行RT-PCR扩增,分别检测RKIP,PTEN,MKK4,nm23基因的表达强度并与对照组进行对比。
结果:DU145和PC-3细胞在经过1,25二羟基维生素D<,3>作用以后 nm23基因的表达相比对照组显著上调(P<0.05),在DU145细胞,分别上调了45.13%、28.67%和21.12%,在PC-3细胞则上调了12.73%、7.83%和5.96%,而RKIP,PTEN与MKK4的表达与对照组相比没有显著差异。
结论
1,25二羟维生素D<,3>抑制DU145和PC-3细胞增长的机制与调控肿瘤转移抑制基因nm23有关。而与其他肿瘤转移抑制基因RKIP,PTEN,MKK4无关。