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研究背景近年来,肝细胞癌(HCC)发病率逐年升高,成为一些地区特别是亚洲以及撒哈拉以南的非洲地区的一个重要的疾病负担。HCC排在肿瘤发病的第五位,全世界每年死于HCC的患者达50万。而我国是原发性肝癌的主要高发区,全世界有50%的病例来自中国。广西是我国肝癌高发区之一,2004-2005年肝癌死亡占全部恶性肿瘤死亡的30.70%,居恶性肿瘤死亡的第1位。HCC的流行,严重危害人们的健康和生命。HCC的预防与控制具有重要的意义,而病因研究是制定预防与控制措施的关键。单核苷酸多态性(SNP)作为第三代遗传标志,常被用作复杂性疾病特别是肿瘤的遗传易感性标志。通过对基因SNP与肿瘤易感性的相关性研究,可以确定肿瘤相关的遗传易感基因,还可为揭示肿瘤发生的分子机制提供遗传学方面的证据。HCC的发生与发展具有明显的性别差异,提示性激素在HCC的病因机制中发挥重要的作用。而体内性激素水平受到众多的因子调节,包括合成、代谢、转运相关的因子,如代谢酶、受体、结合蛋白等,这些因子与HCC发生的关系值得研究。以往研究显示,性激素代谢酶、受体基因多态性可能与HCC发病风险相关,但性激素结合蛋白(SHBG)基因多态性与HCC发病的关系尚无报道。IL-6是一个多功能的细胞因子,负责应对肝脏病毒感染和炎症反应,其表达水平增高而所致的促HCC作用受到性别因素的调节。以往包括男女HCC患者的病例对照研究结果均未发现IL-6基因SNP与HCC发生风险有关,考虑结果可能受到性别因素影响较大。本研究通过以医院为基础的病例对照研究,初步探讨SHBG基因多态性与HCC易感性的关系。另外,为控制性别因素的影响,单独在男性中研究IL-6基因多态性与HCC易感性的关系。本研究试图从遗传学方面对上述因子与HCC发生的关系进行初步的探讨,旨在为HCC的病因研究提供一定的参考。第一部分性激素结合球蛋白基因多态性与肝细胞癌发生关系的研究目的探讨性激素结合球蛋白基因SNP与肝细胞癌(HCC)发生的关系,分析各基因型与吸烟、饮酒、乙肝病毒(HBV)感染等肝癌危险因素在肝癌发生中的交互作用,并比较各基因型HCC患者发病年龄的差异,为阐明性激素与HCC发生关系提供新的思路。方法本研究采用以医院为基础的病例对照研究方法。选择从2007年1月至2010年6月,来自广西医科大学第一附属医院、广西医科大学附属肿瘤医院住院的HCC新发病例621例为病例组,所有患者均经临床或病理学确诊。选择同期来自广西医科大学第一附属医院脊柱骨科、创伤外科治疗的非肿瘤患者621例为对照组。对照组研究对象按年龄、性别、民族与病例频数匹配。所有对象均同意参与调查,并签署知情同意书。由经过专门培训的调查员对所有研究对象进行面对面调查,内容包括人口学资料、既往史、个人史、家族史、吸烟史、饮酒史以及饮食习惯和生活方式等。研究对象入院次日清晨空腹采集静脉血2ml,于当日提取其基因组DNA。通过SNPinfo (http://snpinfo.niehs.nih.gov/)平台对SHBG基因功能SNP位点预测及筛选,选出Asp327Asn位点(rs6259),采用ABI7500实时荧光定量PCR仪SHBG基因候选多态位点进行基因分型。应用SPSS13.0for windows统计软件对数据进行统计分析。计数资料的比较采用X2检验或者确切概率法。基因与疾病关系和因素间的交互作用以多因素logistic回归模型进行分析,以比值比(odds ratio, OR)及其95%可信区间(confidence interval,CI)表示相对危险度。应用Kaplan-Meier生存曲线描述各基因型的发病年龄,并对不同基因型发病年龄进行Log-Rank检验比较。结果1.病例组和对照组在性别、年龄、民族等因素分布频率差异无统计学意义,均衡可比；但是,吸烟史、饮酒史、HBV感染(HBsAg阳性)、HCC家族史、食鱼生史等因素,两组比较差异均有统计学意义(p<0.01)。2.对照组中基因型分布符合哈迪-温伯格(Hardy-Weinberg)遗传平衡定律(x2=2.18, P=0.14)。Asp、Asn等位基因频率在病例组分别是92.51%、7.49%,在对照组分别是89.69%、10.31%,两组比较,差异有统计学意义(x2=55.15, P<0.01)。Asp/Asp、Asp/Asn、Asn/Asn基因型在病例组中频率分别是86.31%,12.40%,1.29%,在对照组中的分别是81.00%,17.39%,1.61%,两组比较差异有统计学意义(x2=6.465,P=0.04)。3.与携带基因型Asp/Asp个体相比,Asp/Asn、Asn/Asn基因型与HCC发生风险无统计学关联。然而,将携带等位基因Asn基因型合并(Asn/Asn+Asp/Asn),与携带基因型Asp-Asp个体相比,其能显著降低HCC发生风险(OR=0.63,95%CI:0.40～0.92)。4.交互作用分析发现,该基因与饮酒(P<0.05)及HBV感染(P<0.01)存在交互作用,而与吸烟无交互作用(P=0.22)。携带Asp/Asp基因型同时具有饮酒史个体HCC发生风险是携带突变基因Asn且无饮酒史个体的3.45倍(95%CI：1.74-～.83),而携带Asp/Asp基因型同时感染HBV个体HCC发生风险则是携带突变基因Asn且无HBV感染个体的40.77倍(95%CI.21.60～76.97)。5.对621例HCC患者的发病年龄进行生存分析发现,Asn/Asn+Asp/Asn基因型与Asp/Asp基因型携带者的发病年龄差异无统计学意义(x2=2.18,P>0.05)。分层分析发现：具有饮酒史HCC患者中,携带Asn/Asn+Asp/Asn基因型可以使患者发病年龄推迟约6岁(x2=6.91,P<0.01)。结论性激素结合球蛋白基因Asp327Asn位点多态性可能与HCC发生风险和发病年龄有关。该基因与饮酒、HBV感染等危险因素具有交互作用。第二部分IL-6基因启动子区-572位点多态性与男性肝细胞癌发生关系的研究目的探讨IL-6基因启动子区-572位点多态性与男性HCC发生的关系。方法本研究采用以医院为基础的病例对照研究方法。以500例来自广西医科大学第一附属医院、广西医科大学附属肿瘤医院住院,经临床或组织病理学诊断为HCC,且无其他器官肿瘤史的男性患者作为病例组,同期来自广西医科大学第一附属医院骨科和眼科的无肿瘤病史的男性患者590例作为对照组。应用ABI7500fast实时荧光定量PCR仪对IL-6基因启动子区-572位点SNP进行分型,采用x2检验对计数资料进行分析,并以非条件Logistc回归模型分析不同基因型携带携带者罹患HCC风险及基因-环境的交互作用。结果-572位点G/C等位基因、各基因型频率在病例组和对照组中分布差异均无统计学意义(p>0.05)。但是,多因素Logistc回归分析发现,男性携带G等位基因个体(CG+GG) HCC发生风险是CC基因型的1.31倍(95%CI：1.00-1.71)。交互作用分析发现HBV感染与IL-6多态性具有交互作用(P=0.01),携带G等位基因同时合并HBV感染个体的HCC发生风险是携带CC基因型且无HBV感染者的5.95倍(95%CI：3.99-8.87)；而吸烟(P=0.15)、饮酒(P=0.06)与IL-6多态性无交互作用。结论IL-6基因启动子区-572位点多态性可能与男性HCC发生有关。该位点多态性与HBV感染具有交互作用。