近年来,随着我国水产养殖业地蓬勃发展,鱼类养殖病害的发生造成了巨大经济损失。药物与抗生素等滥用的弊端逐渐暴露,鱼类疫苗开发及应用成为健康养殖亟待解决的首要问题。鳗弧菌(Vibro anguillarum)和迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)是我国水产养殖业中两种重要病原菌,可感染多种经济鱼种,引起弧菌病和爱德华氏菌病。目前,国内已开发的疫苗多为针对一种病原的单品种疫苗,多次免疫工作量大且免疫效果也未知。联合免疫不仅可简化免疫程序,节约免疫成本,且可降低因接种对鱼体的影响。本研究基于课题组原有的单品种减毒活疫苗MVAV6203和WED,分别在实验室动物模型斑马鱼和临床鱼种大菱鲆上进行了两活疫苗的联合免疫效力分析,同时以福尔马林灭活鳗弧菌为抗原,考察了壳聚糖和壳寡糖在鱼用疫苗开发中的佐剂潜能。两种减毒活疫苗免疫接种策略的研究发现,疫苗混合后的联合免疫其免疫保护效果比单独依次接种要好,在斑马鱼和大菱鲆上免疫一月后对鳗弧菌和迟钝爱德华氏菌的相对免疫保护力达90%和70%以上。进一步进行了联合免疫的应答机理分析,通过RT-qPCR分析发现,联合免疫主要激活斑马鱼上Toll-like受体信号通路,同时激活MHC Ⅰ和MHCII抗原处理以及递呈过程；在大菱鲆上,血清ELISA结果显示联合免疫激发的抗体水平比起单独免疫具有一定程度的提高,且联合免疫大菱鲆体内的MHC Ⅰ和MHC Ⅱ表达同时上调,显示两抗原处理及递呈过程也被同时激活。对壳聚糖和壳寡糖佐剂潜能分析中,以斑马鱼为实验动物,灭活鳗弧菌接种一月后的相对免疫保护力为50%左右,在加入一定量的壳聚糖或者壳寡糖后灭活鳗弧菌相对免疫保护力达85%以上,与兽用油佐剂相当。以大菱鲆为实验动物,疫苗接种后三个月内的免疫保护效果分析发现,加入壳寡糖后疫苗的相对免疫保护力均超过80%以上,明显高于灭活鳗弧菌单独接种情况,且免疫鱼血清抗体水平的分析发现,壳寡糖能一定程度上增强灭活鳗弧菌的体液免疫效果,而血清中的抗体也能与溶藻弧菌和哈维氏弧菌进行反应,故壳寡糖是一种较好的佐剂分子。综述所述,本工作对鱼用疫苗的应用研究将加速鱼用疫苗的开发及产品的升级。