背景:孢子丝菌病是双相型真菌孢子丝菌复合体感染而导致的深部真菌病,是一种人畜共患的感染性疾病。孢子丝菌广泛存在于自然界中腐朽的植被、土壤和动物粪便中,人或动物因外伤感染此菌而发病,也有通过呼吸道吸入而引发肺部感染的案例报道。孢子丝菌病的在全球高发地区有巴西、墨西哥以及中国的吉林省。其主要侵犯皮肤和皮下组织,临床表现为多形性,较少发生内脏的血源性播散。目前孢子丝菌病的主要治疗方法为系统药物治疗,包括伊曲康唑、碘化钾、特比萘芬、氟康唑、两性霉素B等药物,有效率高、疗效确切等优点。但是,随着唑类药物的广泛应用,出现了越来越多的关于耐药的案例报道,同时它还具有肝毒性[1],肝功能不全者禁用。而两性霉素B由于具有较强的肾毒性[2]导致患者不能耐受。随着真菌感染人群的增加及抗真菌药物耐药性的增加,临床对于新型抗真菌药物研发的需求日益迫切。中药是中华民族的伟大资源宝库,临床疗效显著,具有来源广、副作用小、抗菌谱广、较少出现耐药等优点,使研究、开发抗真菌中药具备良好前景。近年来,国内外对有效中药成分抗真菌进行了广泛研究,其中紫草素、白藜芦醇、蛇床子素、土荆皮乙酸4种中药单体有明显体外抗真菌活性,但其对抗孢子丝菌研究较少。研究目的:本课题研究紫草素、白藜芦醇、蛇床子素、土荆皮乙酸4种中药单体体外抗孢子丝菌体的活性,及中药单体联合伊曲康唑抗孢子丝菌的量效关系。同时,在电镜下观察中药单体作用前后的孢子丝菌形态变化,初步探讨中药单体体外抗孢子丝菌的作用及机制。研究方法:1琼脂扩散法:使用打孔法对四种中药单体是否具有体外抑孢子丝菌活性进行初步定性。2微量液基稀释法:分别在孢子丝菌的菌丝相与酵母相两种形态下用微量液基稀释法来测定各药物的MIC值。孢子丝菌菌丝相和酵母相体外药敏试验分别参考美国临床实验室标准化委员会（CLSI）M38-A方案与M27-A2方案。3棋盘式微量稀释法:通过棋盘式微量稀释法测定FICI值,探讨中药单体联用伊曲康唑体外抗孢子丝菌活性并评价其量效关系。4电镜观察:用扫描和透射电镜观察孢子丝菌的形态在经过中药单体药物作用前后的变化,初步推测中药单体抗孢子丝菌作用的机制。结果1通过琼脂扩散试验可观察到在平板培养基上,四种中药单体均可出现抑制孢子丝菌生长的抑菌圈,说明四种中药单体均对孢子丝菌有不同程度的抑制作用。2紫草素对孢子丝菌菌丝相和酵母相的MIC值范围均为3.125-25ug/ml,平均MIC值分别为8.87ug/ml、6.31ug/ml;蛇床子素对孢子丝菌菌丝相和酵母相的MIC范围分别为12.5-50ug/ml、6.25-25ug/ml,平均MIC值分别为27.69ug/ml、16.56ug/ml;白藜芦醇对孢子丝菌菌丝相和酵母相的MIC范围均为25-100ug/ml,平均MIC值分别为54.44ug/ml、53.06ug/ml;土荆皮乙酸对孢子丝菌菌丝相和酵母相的MIC范围分别为100-200ug/ml、50-100ug/ml,平均MIC值分别为134.44ug/ml、76.11ug/ml。四种中药单体中,紫草素对孢子丝菌MIC值最小,体外抑菌活性最强。3紫草素与伊曲康唑联用的FICI范围菌丝相为0.25-2.03、酵母相为0.25-2.06,表现出协同作用的实验菌株大约在半数左右,多数菌株在伊曲康唑浓度为1/4MIC时协同作用最强。4电镜下示:未给药时孢子完整饱满,形状较规则,呈圆形至长椭圆形,细胞壁、细胞膜均完整连续、边界清晰。胞浆数量丰富,且细胞器、细胞核发育完好。菌丝完整、粗细均匀、粗壮饱满。经紫草素作用48h后,菌细胞形态不规则,细胞壁、细胞膜、细胞器膜厚薄不均、边缘模糊、疏松碎裂、局部溶解,完整性破坏、连续性中断,有内含物质漏出。菌丝表面皱缩、粗细不均、断裂、粘连,菌丝细胞壁破裂,内容物外露。结论1四种中药单体体外试验中均对孢子丝菌有不同程度的抑制作用,其中紫草素对孢子丝菌的敏感性最高,紫草素＞蛇床子素＞白藜芦醇＞土荆皮乙酸。2紫草素、蛇床子素、土荆皮乙酸、伊曲康唑对孢子丝菌酵母相的敏感性大于菌丝相。3紫草素与伊曲康唑联用可以表现为协同作用,当伊曲康唑浓度为1/4MIC时两者协同作用最强。4电镜结果显示紫草素作用后的孢子丝菌的细胞壁及细胞膜完整性发生变化,细胞肿胀、变形、破裂,出现细胞膜的溶解、内容物流出。菌丝粗糙、断裂、皱缩、粘连。