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一、研究背景： 类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis，RA)是以关节炎症和滑膜细胞增殖为特征的全身性自身免疫性疾病，最终造成关节结构的破坏。趋化因子(Chemokine)是一类可诱导的分泌型细胞因子，在RA中趋化因子对炎性细胞在关节局部的浸润过程中具有极其重要的作用，并与滑膜炎、组织破坏及血管新生密切相关。它们的这些生物学功能是通过配体与受体结合的方式来发挥的，而CXCR3与CCR5是RA中趋化因子的标志性受体。 白介素—8(IL-8)是一种CXCR3的重要配体，具有很强的中性粒细胞趋化作用和促血管生成作用。另一种CXCR3的配体—γ干扰素诱生蛋白10(IP-10)是由单核细胞，成纤维细胞和内皮细胞在IFN-γ的刺激下产生的，并在T细胞迁移至炎症部位起重要作用。与IL-8的作用相反，它能够拮抗血管生成作用。活化T细胞调节的正常T细胞表达和分泌的因子(RANTES)能吸引CD4~+／CD45RO~+T淋巴细胞向炎症部位游走，并且关节部位的RANTES表达与关节炎症以及关节的破坏程度相关。 因此我们通过检测活动期RA患者血清中CXCR3配体IL-8、IP-10和CCR5配体RANTES的水平，并与缓解期RA患者、骨关节炎(OA)患者和健康人进行对照，—嘟坷’材2004届临床医学硕士学位论文以探讨趋化因子在RA疾病发生和发展过程中所发挥的作用;同时进一步了解它们的血清水平与一些临床常用的指标的关系，希望能为RA寻找到能判断病情活动和预测预后的简便的参考指标。二、实验方法1.对象与方法 连续选取2002年n月~2004年3月在浙江大学医学院附属第二医院风湿科门诊或住院的病历资料完整的RA患者87例，并将其分为活动期和缓解期(其中活动期58例、缓解期29例)，活动期患者为I组，其中按病程的长短以6个月为界，小于6月的为I。组(37例)，大于6月的为I、组(21例);缓解期患者为11组(29例);以患者为m组(21例)，健康对照组为W组(30例);均符合各自的纳入标准与排除标准。2.实验方法2.1主要实验试剂:2.1.1 IL一8和RANTES试剂盒购于BIOSOURCE EUROPE S.A2.1.2 IP一10试剂盒购于CYTIMMUNE SCIENCE INC2.2外周血标本的采集与处理:均为清晨空腹肘静脉抽取5ml外周血置于消毒试管内，静置，2小时内在离心机上3000转/分离心10分钟，分离血清，置于一80℃低温冰箱中保存备用。2.3外周血IL一8、IP一10和RANTBS的检测:为酶联免疫双抗体夹心法，根据酶标仪的吸光度换算各趋化因子含量，建立标准曲线:在半对数图上以标准品的吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，描出各点，并连成直线作标准曲线，在标准曲线图上读出待测标本各趋化因子浓度。2.4其它生化指标的测定:ESR用魏氏法，以朋/h表示;RF、CRP补体(C3、C4)与免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)用全自动免疫速率散射比浊法测定，RF以IU/ml表示，CRP以mg/L表示，IgG、IgM、IgA以g/L表示，C3以g/L，C4以mg/L表示。 ___一—嘟坷’树2004届临床医学硕士学位论文2.5活动期RA患者手、腕关节X线片的判读:根据关节病变轻重分为I一W级，分别计为l~4分。3.统计学处理: 所有数据录入SPSS n .5 For Windows统计软件包。对计量资料先进行shapir。一wilk正态检验，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间多重比较采用Student--Newman一Keuls法;偏态分布的以扩(吸~姗表示，多组之间的比较采用Kruskal一Wall此检验，组间多重比较采用Mann一Whitney检验。计数资料用频数(比率)表示，组间差异采用x’检验。单因素相关性分析采用Spearman相关分析。三、结果1.各组血清IL一8、IP一10与RANTES的测定结果: 各组血清工L一8水平4组比较差异具有显著性(x，二36.917，P二0.000);组间两两比较发现:活动组和缓解组的血清IL一8水平较健康对照组显著增高(均尸<凡);而活动组与缓解组比较差异无显著性，但显著高于以组(尸<几)。 各组的血清IP一10水平4组比较差异具有显著性(x’=31.572，尸二0.000);组间两两比较发现:活动组的血清IP一10水平较健康对照组显著增高(均P<几);并且显著高于缓解组和以组(尸<凡)。 各组的血清RANTES水平4组比较差异具有显著性(x’=34.964，尸=0.000);组间两两比较发现:活动组和缓解组的血清RANTES水平较健康对照组显著增高(均尸<凡);而活动组和缓解组比较差异无显著性，但显著高于OA组(尸<几)。2.血清促炎因子与抑炎因子的平衡分析 由IL一s、IP一。、RANTEs计算可得些奥、华岁李琴旦。4组比较差异具有显著性 IP一10 IP一10(x’=7.928，p二0.048)，组间两两比较发现:活动组的该比值与正常组比较差异具有显著性(尸<凡)，而与缓解组和以组相比差异无显著性。3.血清IL一8、IP一10、RANTES与生化指标、关节肿胀数、手腕关节X线影像学表嘟加声’认驴2004届临床医学硕士学位论文现分期的相关性分析: 血清IL一8水平与ESR、CRP、IgG、IgA、IgM、C3、C4及外周血WBC、Hb、Plt，手腕关节X线影像学表现分期和关节肿胀数