论文部分内容阅读
目的通过对重庆地区普通成年男性流行病学调查及实验室检测,了解该地区成年男性大豆异黄酮内暴露水平,明确大豆异黄酮内暴露水平与男性精液质量和性激素水平之间的关联。通过动物实验研究探讨不同剂量下的大豆异黄酮代谢物对血清性激素水平及精液质量的影响。为探讨大豆异黄酮对男性生殖健康的不良影响提供参考依据。方法1、人群研究:研究对象为2015年在重庆市丰都县社区招募的普通成年男性,通过复合式问卷收集研究对象的基本信息,现场采集志愿者的血液、尿液及精液样本。采用高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)分析人群尿液大豆异黄酮代谢物水平,计算机辅助精子分析系统(Computer-aided sperm analyzer,CASA)进行精液参数分析,Diff-Quick试剂盒染色检测精子形态,染色质结构分析法(Sperm chromatin structure assay,SCSA)检测精子核DNA碎片指数,实时荧光定量PCR方法测定精子线粒体DNA(Mitochondrial DNA,mtDNA)拷贝数,长链PCR方法检测mtDNA完整性,化学发光法检测人群血清性激素水平(睾酮、卵泡刺激素、黄体生成素、雌二醇、孕酮、泌乳素)。采用SPSS16.0软件分析了大豆异黄酮尿代谢物水平与精液质量及性激素水平之间的关联。研究对象的纳入标准为:(1)禁欲天数为2~7天;(2)年龄18~55周岁男性;(3)无泌尿系统感染史、附睾炎病史、睾丸损伤疾病史、精索静脉曲张治疗史、睾丸下降不全史;(4)无喉结、阴毛、乳腺发育异常、阴茎异常、睾丸损伤、附睾炎症、精索静脉曲张、隐睾术后;(5)无五项精液参数均缺失者;(6)尿肌酐(Creatinine,CR)浓度在0.3~3g/L。最终纳入161例作为研究对象。2、动物实验研究:采用60只4周龄(青春期)SD雄性大鼠进行亚慢性染毒,随机分为6组,分别是正常对照组、染料木素5mg/kg、50mg/kg、500 mg/kg和2000mg/kg组、阳性对照己烯雌酚0.1mg/kg组,连续灌胃29天。分别在染毒结束时(8周龄)以及动物成年后(11周龄)进行取材,观察指标包括脏器系数、睾丸组织结构、性激素水平及精液质量。采用蛋白质印迹(westernblot,wb)检测睾丸erβ的表达水平。结果1、人群研究:本次研究检测了人群尿液染料木素、大豆苷元,黄豆黄素,雌马酚,二氢大豆苷元代谢物水平。jonckheere-terpstra检验结果显示,随着总的大豆异黄酮浓度等级的增加,精液体积和精子密度呈现递减趋势,结果有统计学意义(p=0.044和0.018),随着雌马酚水平的增加,精液体积呈增加的趋势(p=0.034)。在性激素水平上,染料木素与黄体生成素(p=0.019),黄豆黄素与睾酮(p﹤0.001),二氢大豆苷元与孕酮(p=0.021)均呈负相关。采用多元线性回归方法校正潜在混杂因素(年龄、体质指数、禁欲天数、吸烟状态、饮酒状态)后,大豆异黄酮尿代谢物水平与上述精液参数关联消失,与性激素水平关联依旧存在。本研究未发现大豆异黄酮与dna损伤指标(dna碎片指数,mtdna拷贝数,mtdna完整性)之间存在关联。此外多元线性回归结果显示,精子dna损伤指标与精液质量之间存在关联。2、动物实验研究:大鼠青春期摄入染料木素后,染毒结束时及成年期染料木素各剂量组大鼠体重及脏器系数较正常对照组比,差异无统计学意义。he染色结果显示染毒结束时染料木素2000mg/kg组睾丸组织生精小管细胞管腔中细胞稀疏,排列紊乱,成年期染料木素2000mg/kg组大鼠生精小管管腔内精子数量较正常对照组比减少,其余各染料木素剂量组睾丸组织形态无明显病理学改变。性激素检测表明,染毒结束时染料木素5mg/kg和50mg/kg剂量组的血清雌二醇水平较正常对照组比降低(p﹤0.05),染料木素50mg/kg剂量组的血清卵泡刺激素和睾酮水平升高(p﹤0.05);染料木素2000mg/kg剂量组在染毒结束时未观察到激素水平的改变,但到达成年期时其雌二醇浓度升高,睾酮浓度降低(p﹤0.05)。精液质量分析发现,染料木素2000mg/kg剂量组大鼠在成年期出现精子密度和精子总数的降低(p﹤0.05)。此外,染毒结束时染料木素各剂量组的睾丸erβ表达未出现明显改变,但成年期大鼠睾丸β-雌激素受体(estrogenreceptor-β,erβ)的表达水平随着染料木素剂量的增高而增高。结论人群结果提示,正常膳食摄入大豆异黄酮对男性精液质量没有明显影响,但是对血清性激素水平会有一定影响,如降低血清睾酮、黄体生成素、孕酮。动物实验结果表明,一定水平的染料木素(染料木素5mg/kg组、50mg/kg组、500mg/kg剂量组)对雄性生殖健康无明显不良影响,但是当染料木素剂量达到2000mg/kg时,血清睾酮水平、精子密度、精子总数下降及精子畸形率增加。