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目的研究人乳腺癌MDA-MB-231细胞源exosomes (M-Exo)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的影响,探讨肿瘤血管内皮细胞异常表达EGFR的方式,在此基础上,进一步观察M-Exo对HUVECs增殖、迁移及体外成管能力的影响,探讨M-Exo与乳腺癌血管生成的关系。方法1.免疫细胞化学法与Western blot法检测MDA-MB-231细胞EGFR表达;2. M-Exo的制备及其携带EGFR的检测:采用超速分级离心和蔗糖密度梯度离心提取纯化M-Exo,Western blot法检测M-Exo EGFR表达;3.观察M-Exo对HUVECs EGFR表达的影响:免疫细胞化学法与Western blot法检测HUVECs与200μg/mL M-Exo混合培养24 h前后EGFR蛋白的表达;RT-PCR法分别检测MDA-MB-231细胞和与200μg/mL M-Exo共培养24 h后HUVECs EGFR mRNA表达;4.观察M-Exo对HUVECs增殖、迁移及体外成管能力的影响:MTT法检测M-Exo对HUVECs的增殖率的影响;Transwell小室法检测HUVECs与M-Exo混合培养24 h后迁移能力的影响;体外成管实验观察HUVECs与M-Exo混合培养24 h后管腔样结构形成变化。结果1.免疫细胞化学结果显示:MDA-MB-231的EGFR蛋白表达为阳性,着色部位主要在胞膜和胞质,呈棕黄色颗粒状,Western blot结果可见分子量170KD的EGFR蛋白呈阳性反应带;2. Western blot结果显示M-Exo EGFR的蛋白表达为阳性;3. HUVECs与200μg/ml M-Exo混合培养24小时,免疫细胞化学染色结果显示部分HUVECs胞质出现淡黄色或棕黄色颗粒,EGFR阳性表达率为21.4±3.1%,与对照组相比,有明显差异(P <0.01);Western blot法结果可见HUVECs分子量170KD的EGFR蛋白阳性反应带; RT-PCR法检测结果显示MDA-MB-231细胞的EGFR mRNA表达为阳性,而HUVECs与M-Exo共培养24 h后EGFR mRNA为阴性表达;4. MTT实验显示,各浓度组M-Exo均能促进HUVECs增殖,呈时效量效依赖性(P < 0.05)。结果显示200μg/ml的M-Exo处理组线性关系最好,因此我们的实验中采用的M-Exo浓度为200μg/ml。200μg/ml M-Exo处理HUVECs细胞24小时,HUVECs细胞的迁移能力提高,对照组与实验组迁移穿膜细胞数分别为18.4±5.07和51.4±8.93,差异具有统计学意义(P <0.01);HUVECs的成管能力也明显提高,对照组与实验组形成管腔数分别为2.6±0.93和6.4±1.07,差异有统计学意义(P <0.05)。结论1. M-Exo携带EGFR蛋白,并可介导其向血管内皮细胞转移,这可能是肿瘤血管内皮细胞异常表达EGFR的一种方式;2. M-Exo以时间剂量依赖的方式促进HUVECs增殖,且可增强HUVECs的迁移能力及其体外管腔形成能力,提示M-Exo可能与乳腺癌血管生成存在密切联系。目的了解重庆市城乡居民肿瘤预防健康教育状况及居民获得肿瘤预防知识的主要途径;初步探索重庆市城乡居民肿瘤健康教育对策,为制定针对重庆市的肿瘤防治策略提供理论依据。方法1.以重庆市部分城乡居民为调查对象,用自行设计的调查问卷,初步调查重庆市城乡居民肿瘤预防教育的现状及获得肿瘤预防知识的主要途径。2.分别针对城市和农村采取多样化形式的肿瘤预防健康教育干预措施,包括演讲、防癌科普图片宣传、肿瘤预防宣传手册及现场咨询等。3.干预后再次调查重庆市城乡居民的肿瘤防治知识与态度。将干预前、后问卷调查的结果进行比较,对收集到的资料经核对后采用双录入法,用Epidata 3.1软件建立数据库,并用SPSS 17.0统计软件进行统计分析。结果1.重庆市总体肿瘤预防健康教育开展水平较低,且农村低于城市。2.重庆市居民获得肿瘤预防知识的主要途径:城市居民以电视节目为主,其次为报纸杂志和互联网,农村居民以电视节目为主;居民对健康教育宣传形式的喜好主要是知识讲座/专家咨询。3.重庆市城乡居民对恶性肿瘤预防知识的认知水平偏低,健康意识较差,恶性肿瘤早期症状知晓率低;4.经多种途径干预后,参与调查的居民肿瘤防治知识知晓率和恶性肿瘤早期症状知晓率明显提高,对肿瘤预防的态度也明显改变。结论重庆市总体肿瘤预防健康教育开展水平较低;肿瘤健康教育可以从根本上预防肿瘤,应增加对肿瘤健康教育的人力、财力和物力的投入,加大宣传力度;针对当地居民采取合理、有效的健康教育形式是预防肿瘤的有效措施。