基于活化HIV前病毒的中药分子筛选及初步验证

来源 :广东医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dfjixie2010
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[目的]  本项目拟在细胞模型上筛选能活化HIV潜伏病毒库的中药活性分子,并从分子水平进一步验证其对HIV潜伏病毒库的活化效能,初步探讨其活化HIV潜伏库的作用机制,为后续开发具有高效激活效能的药物提供实验依据。  [方法]  本实验室所需2株艾滋病毒潜伏细胞模型J-lat GFP clone A72和J-lat full length clone10.6由香港大学艾滋病研究所惠赠。特定浓度的中药分子溶液作用J-lat GFP clone A72模型,运用流式细胞仪检测该细胞模型中绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)的荧光强度变化;将初筛得到的中药活性分子作用于细胞模型J-lat full length clone10.6,流式细胞仪检测GFP荧光强度、酶联免疫吸附法检测艾滋病毒的标志性蛋白P24的相对含量、流式细胞仪检测细胞模型细胞周期变化;并将中药活性分子作用人外周血,流式细胞仪检测淋巴细胞活化分子CD69、CD38和HLA-DR的表达变化。  [结果]  1.通过J-lat GFP clone A72细胞模型已筛选得到具有活化作用的中药分子,以白藜芦醇和盐酸小檗碱作为代表性药物,作用强度分别为对照组的2.19倍和2.00倍。  2.白藜芦醇和盐酸小檗碱分别作用于J-lat full length clone10.6细胞模型后,酶联免疫吸附实验结果表明P24蛋白相对含量与药物浓度存在剂量依赖关系,且P24相对含量与GFP荧光强度也具有明显相关性。  3.盐酸小檗碱能影响J-lat full length clone10.6细胞的细胞周期,使G1期细胞减少,G2期细胞增多。  4.血液学实验表明白藜芦醇能刺激淋巴细胞早期活化分子CD69的表达,中晚期活化分子CD38、HLA-DR无显著变化。  [结论]  盐酸小檗碱和白藜芦醇在体外细胞模型中具有抗HIV潜伏作用;血液学的探讨性实验表明白藜芦醇可能具有促进淋巴细胞早期活化的潜能。
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