纺锤体极体是酵母的微管组织中心，半桥是有丝分裂中新的纺锤体极体的形成点，Sfilp定位在半桥上，缺失Sfilp，细胞有丝分裂停滞在G2/M期，减数分裂产生非正常孢子。Sfilp通过其内部重复序列与中心体蛋白Cde31p结合，重复序列之间以间隔序列隔开，间隔序列的存在为相邻中心体蛋白提供分子间相互作用的空间。Sfilp/Cdc31p复合物的空间构象与Ca2+的浓度密切相关。Sfilp的第765位至775位氨基酸处在中部重复序列的最后一个间隔序列(gap)上，是影响蛋白质折叠的关键部位。有研究表明突变为脯氨酸会使α-螺旋的折叠停止。所以，在该实验中研究第774位氨基酸突变后对Sfilp结构和功能的影响，为研究Sfilp结构与功能之间的关系以及Ca2+对Sfilp空间构象的调控机理提供实验基础和理论依据。　　 在该实验中，化学合成野生型多肽SP774-T和突变多肽SP774-P，突变多肽由野生型多肽的苏氨酸突变为脯氨酸得到。一方面，研究突变对Sfilp结构的影响，包括：通过高效液相色谱(HPLC)检测多肽的纯度，通过蛋白质在线工具软件、辅助基质电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析多肽的一级结构，通过紫外吸收光谱(UV)、圆二色光谱(CD)研究pH值、金属离子对多肽二级结构的影响，通过计算机同源建模(Homology Modeling)、MOE分子模拟研究多肽的三级结构；另一方面，研究突变对Sfilp功能的影响，包括：通过定点诱变PCR技术构建生产突变蛋白的重组质粒，重组质粒转化酵母菌株构建突变酵母菌株，此菌株利用突变蛋白进行生长，观察突变菌株的生长情况。　　 实验结果表明在Ca2+浓度为零的条件下，野生型多肽与突变多肽的空间构象非常相似，α螺旋含量分别为67.45％和61.33％。当1摩尔当量的Ca2+加入体系后，野生型多肽SP774-T的α螺旋含量提高至84.27％，但是突变多肽SP-P的α螺旋含量基本维持不变(64.27％)。说明Sfilp的第774位氨基酸突变后，影响了Sfilp的空间构象，也从实验的角度印证了Salisbury的“弹性绳”模型。野生型多肽SP774-T的紫外吸收与Cu含量、pn值正相关。pH9时，Cu比例为1、2时，紫外吸收剧增。计算机同源建模和MOE分子模拟得出的空间构象图表明突变后多肽构象末端稍有改变。在23℃下，SP774-P长势良好，在37℃下，生长受到抑制。说明突变后Sfilp的空间结构改变，影响到Sfilp的功能，使酵母不能正常生长。　　 此外，亦做了以下研究：构建可用于肿瘤基因治疗的双基因沉默载体，通过一个shRNA转录单元同时获得两个独立的shRNA转录子，并且由PolⅡ启动子调控转录，由核酶剪切，由MAZ终止。结果显示靶向肿瘤相关基因的双基因沉默载体构建成功，转染细胞后对肿瘤相关靶基因有不同程度的沉默。这种载体构建方法的优点在于单一的转录单元可避免多转录单元之间的启动子干扰效应，且具有组织特异性，此外，核酶切除转录产物5’端帽子结构，MAZ终止位点使3’端无polyA尾巴，减缓了dsRNA由细胞核到胞浆的运输速度，使dsRNA有充分的时间被Dicer酶切割成siRNA，因此可提高RNA干扰技术的应用效果，减少基因沉默过程中的非特异性作用，另外，核酶还可使两个shRNA转录子成功分离。该载体构建方法的实用意义在于嵌入不同组合shRNA的编码基因可得到靶向不同癌基因的双基因沉默载体，其中的表达框还可插入到各种载体中以满足不同的实验需求。