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目的： 通过体外直接接触共培养C57小鼠肺微血管内皮细胞(MEC)与GFP小鼠造血干细胞(HSC)，并在共培养体系中加入Notch抑制剂DAPT，在第4天检测Notch分子的表达，研究MEC促进HSC增殖的分子机制及Notch抑制剂对肺MEC促进HSC增殖的作用，初步探讨Notch信号通路对HSC的影响，为体外扩增HSC提供新的方向和为血液系统疾病寻找潜在的治疗靶点。 方法： ①C57小鼠肺组织经过Ⅰ型胶原酶消化获得MEC，通过免疫荧光及流式细胞术检测其CD31、CD34、CD45、vWF表达情况，连续8天观察P1代MEC生长情况，每天消化3孔用于细胞的计数并绘制MEC的生长曲线。 ②采取Ficoll密度梯度离心法从GFP小鼠的骨髓分离得到单个核细胞(MNCs)，然后利用miniMACS磁珠分选仪分选得到CD117+细胞，利用流式细胞术检测HSC含量及HSC CD34CD117共表达率。 ③体外直接接触共培养骨髓CD117+细胞与P1代的MEC，并在培养体系中加入DAPT，分组为：HSC组、HSC+EC组、HSC+EC+DAPT组、HSC+DAPT组，每组3个复孔。培养至第4天收集造血干细胞样本。根据我们前期试验发现，第4天时共培养组HSC数量与单独组比值变化最明显，故我们提取第4天HSC的RNA含量并进行后续qRT-PCR试验。 ④检测Notch分子的表达：第4天时收集每组三个复孔的HSC并计数;通过离心柱法提取各组HSC的总RNA，检测RNA的A260/280比值并计算RNA含量;实时荧光定量PCR法检测各组HSC的Notch1、Notch2、Hes1的mRNA的表达，2-△△Ct分析法用于分析其相对表达量（RQ值）。 结果： 1、原代MEC的形态学及免疫表型特点：①形态学：24h大部分贴壁生长的细胞呈圆形，少数呈短梭形、不规则形，第4d细胞形圆，大小均一，可见部分相邻细胞连接生长，形成条索样结构;培养第6d细胞增多，可见出芽生长;8d细胞继续增多，细胞伸长、变细，彼此相互接触;第10d变成圆形或卵圆形，单层排列生长;第14d时细胞融合至80％-90％左右，细胞呈多角形、卵圆形或三角形，排列在同一平面，呈典型“铺路石”外观;培养第4-7天为P1代MEC对数生长期，之后生长变缓，进入平台期;②免疫表型：CD31抗体免疫荧光检测阳性率为54.5％。FACS检测其vWF、CD34、CD31、CD45表达率分别为：81.39％、57.48％、45.8％、0.17％。 2、免疫磁珠分选后获得的CD117+细胞采用0.4％台盼蓝染色，计算细胞活率为97％。荧光显微镜下细胞体积偏小，形圆，大小均等，发绿色荧光。CD117+HSC纯度为99.51％，CD117CD34共表达率为75.85％。 3、4天时各组HSC增殖的情况：①细胞计数（x105个）：HSC+EC组(3.9±0.451)高于HSC组(2.463±0.193);HSC+EC+DAPT组(2.473±0.11)较HSC+EC组(3.9±0.451)减少;P＜0.05;HSC+DAPT组(2.317±0.17)较HSC组(2.463±0.193)减少，P＞0.05;HSC+DAPT组(2.317±0.17)较HSC+EC+DAPT组(2.473±0.11)减少，P＞0.05;②各组HSC的RNA含量：HSC+EC组(2198.467±103.359)高于HSC组(1310.853±110.140);HSC+EC+DAPT组(1453.693±101.125)较HSC+EC组(2198.467±103.359)减少;P＜0.05;HSC+DAPT组(1301.48±102.699)较HSC组(1310.853±110.140)减少，P＞0.05;HSC+DAPT组(1301.48±102.699)较HSC+EC+DAPT组(1453.693±101.125)减少，P＞0.05。 4、荧光定量PCR法检测HSC的Notch1、Notch2、Hes1的mRNA相对表达量即RQ值：(1)Notch1：HSC+EC组(1.924±0.088)高于HSC组(1.01±0.177);HSC+EC+DAPT组(1.033±0.049)较HSC+EC组(1.924±0.088)降低;P值均＜0.05;HSC+DAPT组与HSC组、HSC+EC+DAPT组相比无统计学差异，P＞0.05;(2)Notch2：HSC+EC组(1.479±0.063)高于HSC组(1.003±0.096);HSC+EC+DAPT组(0.919±0.291)较HSC+EC组（（1.479±0.063)降低;P值均＜0.05;HSC+DAPT组与HSC组、HSC+EC+DAPT组相比无统计学差异，P＞0.05;(3)Hes1：HSC+EC组(2.291±0.372)高于HSC组(1.001±0.063);HSC+EC+DAPT组(1.267±0.219)较HSC+EC组(2.291±0.372)降低;P值均＜0.05;HSC+DAPT组(0.899±0.186)较HSC组(1.001±0.063)降低，P＞0.05;HSC+DAPT组(0.899±0.186)较HSC+EC+DAPT组(1.267±0.219)降低，P＞0.05。 结论： 1、肺微血管内皮细胞可以促进造血干细胞体外增殖; 2、肺微血管内皮细胞可能通过Notch信号促进造血干细胞增殖，而加入DAPT抑制Notch信号阻断了内皮细胞对造血干细胞增殖的作用; 3、DAPT抑制内皮细胞对造血干细胞增殖的作用与Notch基因下调有关。