【摘 要】
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在冷冻保存过程中,甘油作为渗透性保护剂阻止了冰晶对精子膜的破坏作用,从而精子的活力、顶体膜完整性和质膜完整性等质量参数均有一定的改善。但是甘油的毒性会造成精子鱼精蛋白的缺失,造成受精率降低。本实验的主要目的是探讨甘油浓度降低后用海藻糖替代部分甘油对冻融延边黄牛精子的蛋白酪氨酸磷酸化、鱼精蛋白的缺乏以及膜脂过氧化的影响。试验分为对照组(6%甘油+0mM海藻糖)和不同浓度海藻糖处理组(3%甘油+0、5
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在冷冻保存过程中,甘油作为渗透性保护剂阻止了冰晶对精子膜的破坏作用,从而精子的活力、顶体膜完整性和质膜完整性等质量参数均有一定的改善。但是甘油的毒性会造成精子鱼精蛋白的缺失,造成受精率降低。本实验的主要目的是探讨甘油浓度降低后用海藻糖替代部分甘油对冻融延边黄牛精子的蛋白酪氨酸磷酸化、鱼精蛋白的缺乏以及膜脂过氧化的影响。试验分为对照组(6%甘油+0mM海藻糖)和不同浓度海藻糖处理组(3%甘油+0、50、100和150mM)。检测冻融牛精子的质量参数、体外获能后的酪氨酸磷酸化水平、线粒体膜电位和活率、鱼精蛋白的缺乏和膜脂过氧化。试验结果如下所示:1.各冻融处理组与鲜精相比,精子活力、动力学参数、质膜完整性和顶体完整性均显著下降(P<0.05)。处理组(3%甘油+100mM海藻糖)的精子活力、动力学参数、质膜完整性和顶体膜完整性显著高于对照组和其他处理组(P<0.05)。2.冻融后的延边黄牛精子获能处理后,进行顶体膜蛋白分离以及蛋白含量的测定。最后用SDS-PAGE和Western blot分析。与对照组相比,3%甘油处理组(3%甘油+100和150mM海藻糖)的精子蛋白酪氨酸磷酸化水平显著高于对照组(P<0.05)。3.用Hoechst33342,PI和JC-1用于同时评估精液活率(头部)与线粒体膜电位水平(中段)。各冻融处理组与鲜精相比,精子活率和线粒体膜电位均显著下降(P<0.05)。处理组(3%甘油+100mM海藻糖)的精子活率和线粒体膜电位显著高于对照组(P<0.05)。4.采用CMA3染色用来检测冻融精子的鱼精蛋白缺乏程度。各冻融处理组与鲜精相比,精子鱼精蛋白缺乏水平显著升高(P<0.05)。处理组(3%甘油+100mM海藻糖)的鱼精蛋白缺失的精子显著低于对照组(P<0.05)。5.为了检测精子膜脂质紊乱水平,用花青素540(M540)和Yo-Pro-1对精子样本进行染色,并用流式细胞仪检测。各冻融处理组与鲜精相比,精子膜脂质紊乱显著下降(P<0.05)。处理组(3%甘油+100mM海藻糖)的活精子率显著高于对照组(P<0.05)。本研究得出的结论是:1.添加100mM的海藻糖替代部分甘油后可以显著改善精子的活力和质膜完整性;2.添加100和150mM的海藻糖替代部分甘油后可以显著提高获能后精子蛋白的酪氨酸磷酸化水平;3.添加100mM的海藻糖替代部分甘油后可以显著改善精子的活率和线粒体膜电位;4.添加100mM的海藻糖替代部分甘油后可以显著改善精子的鱼精蛋白缺乏水平;5.添加100mM的海藻糖替代部分甘油后可以显著改善精子的膜脂质紊乱。
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