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树突状细胞(Dendritic Cell,DC)是目前已知的人体内最强大的抗原呈递细胞,除此之外,它还具有诸多重要的生物学、免疫学功能,如参与启动初始免疫反应、参与T细胞亚群的分化、参与诱导中枢和外周免疫耐受、参与调解B细胞功能、参与固有免疫应答等,在整个免疫系统与免疫发生中占据着十分重要的位置,所以在针对肿瘤的癌症免疫治疗方面,DC也起到了重要作用。目前针对肿瘤免疫治疗所采用的DC疫苗策略首先是将病人体内的DC进行体外扩增培养,然后在体外用肿瘤抗原(凋亡肿瘤细胞或肿瘤细胞裂解物;特异性肿瘤相关抗原;编码肿瘤相关抗原的基因等)刺激DC,最后将DC回输到患者体内诱导特异性抗肿瘤免疫反应。DC疫苗在临床上已经取得了一定的疗效,但仍有许多困难需要研究克服,其难点主要在于:DC的获得、DC的抗原负载方式(抗原种类与刺激方式)、DC的活化程度等,其中最关键的是对抗原负载的方式,如何找到有效的抗原负载方式以增强DC诱导的抗肿瘤免疫反应,还是一个存在于DC疫苗研究过程中的重大难点。所以本课题尝试利用羟基磷灰石颗粒负载肿瘤细胞裂解抗原,观察其是否可以促进DC对抗原的吞噬,并评估了其对DC诱导的同源淋巴细胞体外抑癌的效果。具体研究内容、结果如下:1)以传统的水热合成法制备了细棒状的羟基磷灰石颗粒,所制得的颗粒长径为200-400 nm,短径为30-50 nm,形状均一,分散性良好,经XRD、FTIR、TG分析表征后可知所制得颗粒的成分确实为羟基磷灰石且纯度较高。2)本实验将羟基磷灰石用作生物载体负载MCF-7肿瘤细胞裂解蛋白,所以进一步对制得的羟基磷灰石颗粒的体外降解性能及其生物相容性作了评估,结果显示,制得的羟基磷灰石颗粒在模拟正常体液环境(p H=7.4)和溶酶体内环境(p H=5.6)下90天的降解率分别为31.8%与49.6%,说明制备的羟基磷灰石颗粒用作生物载体有较好的可降解性,既不会因为降解过快导致细胞内环境突变应激,也避免了长时间滞留体内所带来的潜在毒副作用;对Hs578Bst、MCF-7、A549、Huh-7四种细胞3天内的生物细胞相容性实验中,在HAp终浓度为0.1-500μg/m L的范围中,四种细胞的生存率普遍在95%以上,说明制备的羟基磷灰石颗粒有着较好的细胞相容性。3)本实验利用人外周血单个核细胞来源的单核细胞成功诱导培养出DC,并记录了诱导培养过程中细胞形态的变化;利用拟合Langmuir曲线的方法测定了HAp颗粒对TLP的最大负载量,20μg、40μg HAp可分别负载5.8μg、14.0μg TLP;利用细胞荧光染色技术观察DC细胞对负载了TLP的HAp颗粒的吞噬情况,结果显示DC对HAp-TLP的吞噬量明显大于对游离TLP的吞噬。4)利用负载了MCF-7细胞TLP的HAp颗粒分别进行了DC诱导的同源淋巴细胞体外杀伤效果检测、体外杀伤特异性检测以及淋巴细胞的直接体外杀伤效果检测,结果说明淋巴细胞对异源性细胞具有一定杀伤作用(20%-30%),并且DC在经过HAp-TLP刺激后诱导出的淋巴细胞会产生针对TLP来源细胞MCF-7的显著特异性杀伤效果(50%-60%)。