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目的:探讨AXN复合BMSCs构建组织工程神经修复周围神经缺损的效果。
方法:体外培养大鼠BMSCs,与AXN复合构建TEN;雌性Wistar大鼠60只,随机分为3组,每组20只,建立右坐骨神经10mm缺损修复模型。A组:BMSCs与AXN复合构建TEN桥接神经缺损;B组:单纯AXN桥接神经缺损;C组:自体神经移植组。术后4w、12w依次进行干细胞的转归、TEN的移植免疫、神经电生理检测、再生神经组织学观察、小腿三头肌肌纤维横径等检测判断坐骨神经缺损修复情况。
结果:1.成功的进行了BMSCs的体外培养和BrdU标记,初始标记率88.36%,免疫组化染色和流式细胞仪检测培养细胞表型CD44(+)、CD90(+)和CD34(-)。2.AXN与新鲜神经相比较细胞和髓鞘被彻底清除,保持了原有的三维仿生结构,免疫原成份被清除,流式细胞仪MHCII检测结果显示AXN免疫原性明显减弱。3.术后4w,流式细胞仪检测外周血CD3+、CD4+和CD8+T细胞百分比三组间无统计学差异,取移植段切片荧光显微镜下可见再生纤维束状排列,只有A组S-100表达阳性细胞其细胞核内有BrdU阳性表达,B、C组均无表达;术后12w神经电生理检测显示,刺激可以通过移植段神经到达远端的效应器,在神经支配区肌肉可以记录到运动诱发电位,跨过移植神经段的传导速度,A、C组无统计学差异,A、B和B、C组有统计学差异;组织形态学观察显示再生的神经纤维通过远端吻合口,A、C组较B组排列整齐,轴突粗大、致密,移植段内有纵行排列分布的SCs形成Bunger带;术后所有动物均有不同程度肌萎缩,肌纤维横经测量结果显示A、C组无统计学差异,A、B和B、C组有统计学差异。
结论:1、BMSCs与AXN构建的TEN在周围神经缺损修复过程中取得较满意的结果,BMSC作为种子细胞可以在体内存活,并分化为SCs。2、本课题构建的TEN(包括AXN和复合BMSCs的AXN)与自体新鲜神经移植相比较无明显免疫排斥反应,这为将来临床应用TEN提供了新的依据。