【摘 要】
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本研究在前期研究的基础上,进一步对基因工程大肠杆菌（RRhPI/pQE40 E.coli M15）生产（His）6-Arg-Arg人胰岛素原（RRhPI）的发酵工艺及其下游纯化复性工艺进行了全面优化,初步建立了一
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本研究在前期研究的基础上,进一步对基因工程大肠杆菌（RRhPI/pQE40 E.coli M15）生产（His）6-Arg-Arg人胰岛素原（RRhPI）的发酵工艺及其下游纯化复性工艺进行了全面优化,初步建立了一套高效表达、分离纯化简便、回收率好的工艺,并进一步放大至发酵罐水平,为工业生产提供了可行性研究。 采用正交法对培养基组成、培养条件、诱导条件进行优化后,摇瓶培养可收获湿菌体43±0.17g/L（n=3）,包涵体约14±0.52g/L（n=3）,表达水平约为30%,超过现有文献报道水平,而发酵时间较先前工艺缩短18—30小时。将摇瓶优化出的培养基、培养条件放大至发酵罐进行单批发酵,每升培养基可收获E.coli 51..82克（湿重）,包涵体16.23克（湿重）,超过现有文献报道水平。比较了超声破碎细胞和溶菌酶/超声破碎细胞两种方法,并结合对包含体洗涤方法的优化,得到纯度较高的包涵体。对包涵体的纯化复性工艺进行多方面综合考察比较,得到简便高效的纯化复性工艺——二次复性法,纯化的表达产物收率达85%以上:并进一步研究利用DEAE—琼脂糖快流速阴离子交换柱作柱上复性和纯化的工艺,目前尚未见有关文献报道。经酶切纯化后每升培养基可得纯化的人胰岛素约79mg,超过现有文献报道水平。采用纯化后的重组人胰岛素产品经SDS-PAGE检测为单带,且与人胰岛素标准品位置相同。HPLC、氨基酸
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